DNA复制、损伤和修复.ppt

1．光修复 修复对象：紫外线照射形成嘧 啶二聚体 机制：光复活酶识别嘧啶二聚 体并与之结合形成复合物→在 300-600nm可见光照射下，酶获 得能量，将嘧啶二聚体打开→光 复活酶从DNA上解离。 （三）DNA损伤修复 2.切除修复 对象：受损的碱基 修复系统： 糖苷酶（识别、切除受损碱基，产生AP位点。 AP内切酶在AP位点的5’端切断磷酸二酯键。 AP外切酶再切割AP位点的3’端。 DNA聚合酶填补产生的缺口。 最后DNA连接酶连接。 （三）DNA损伤修复 核苷酸切除修复（nucleotide excision repair, NER）系统识别DNA双螺旋形状的变形。 UvrB负责解链，募集核酸内切酶UvrC UvrC在损伤部位的两侧切断DNA链 UvrD去除这两个切点之间的DNA片段 DNA聚合酶Ⅰ和连接酶填补缺口 UvrA识别DNA双螺旋结构变形 （三）DNA损伤修复 E.coli的NER主要由4种蛋白质组成： UvrA UvrB UvrC UvrD 3．重组修复 对于DNA双链断裂损伤，细胞采用双链断裂修复 ，即重组修复。通过与姐妹染色体正常拷贝的同 源重组来恢复正确的遗传信息。 4．SOS修复 （三）DNA损伤修复 类型： （四）基因突变类型及机理 碱基替代 碱基插入与缺失 转座子引起的突变 基因突变分子机理 * U DNA连接酶连接切口 Mg2+ 连接酶 ATP或NAD＋ AMP+PPi或NMN+AMP A T C G P T T P P P A A C C T G A P A C P P P P OH T G G A T C G P T T P P P A A C C T G A P A C P P P T G G P 缺口 3 3 5 5 5 5 3 3 模板链 模板链 复制的主要特点 ● 只有一个复制起点 ● 从起点向两个相反方向复制 ● 复制的速度快，大约每秒延伸500 bp ● RNA引物和冈崎片段均较长 ● 可以连续发动复制 * 三、原核生物DNA的复制 三、原核生物DNA的复制 1.复制起点（origin of replication） ● 一个或多个位富含AT的短重复序列 ● 复制起点控制复制起始 ● 只有一个复制起点 * （一）DNA复制的起始 原核生物DNA复制起始点OriC * * * 原核生物DNA复制的起始复合体 * * DNA复制的起始，RNA引物合成 （二）DNA链的延伸 复制起始位点识别 ↓ DNA双链解链 ↓ RNA引物合成 ↓ 前导链、后续链合成 * 三、原核生物DNA的复制 （二）DNA链的延伸 聚合酶III全酶 引物 聚合酶III全酶 引物 引物体 引物体 解旋酶 解旋酶 复制叉处前导链和随后链同时合成的工作模型 * 2.复制模式 3. 复制方式 θ型复制 （三）复制的终止 ● RNA引物去除 ● 冈崎片段连接 ● 在特殊的终止结构区域停止 * * 关于DNA复制的保真性问题 遵守严格的碱基配对规律 DNA聚合酶在复制延长中对碱基的选择作用 DNA聚合酶3 ’ →5 ’外切活性的校正作用，复制出错时有即时的纠错功能 * 四、真核生物染色体DNA复制的共同特点 ● 复制速度慢（50/sec,原核900/sec) ● 复制子小(40-100kb,原核＞1000kb) ● 多点复制，复制模型为眼睛型（原核单点，θ型） ● RNA引物及冈崎片段的长度均小于原核生物（100-400，原核1000-2000） ● 组蛋白的合成在细胞周期的S期与DNA复制同步 ● 复制过程与原核生物基本相似，但需多种DNA聚合酶和辅助因子参与。 * * ? 亚基数目 3′→5′外切酶活性 5′→3′外切酶活性 功能 DNA聚合酶α 4 - - 引物合成 DNA聚合酶β 1 - - 修复 DNA聚合酶γ 2 + - 线粒体DNA复制 DNA聚合酶δ 2 + - 核DNA 复制 DNA聚合酶ε 〉1 + - 填补缺口、修复 真核生物DNA聚合酶 * 名称 结构 特点 活性 在DNA复制中的作用 PCNA ? DNA聚合酶δ的辅助蛋白 PCNA沿DNA滑动，使聚合酶δ不会从DNA上滑落 RF-C ? 5