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白喉实验室检测技术 免疫所 黄鹤;内容提要; 一、流行病学 ;传染源： 白喉杆菌为严格寄生于人的细菌，迄今为止人类是已知 的唯一宿主。因此，病人和有毒菌株的带菌者为唯一的 传染源。患者在潜伏期即有传染性，不典型和轻型者， 由于容易误诊，在传播白喉中的危险更大。带菌者又可 分为恢复期带菌者和健康带菌者两种。曾受过免疫接种 的人群也有可能得病，部分免疫的人群更常得病而且病 情也更严重。 ;传播途径：飞沫或污染 白喉主要通过呼吸道飞沫传播 其次可通过被污染的手、玩具、文具、食品、手帕等传播，污染食物有时也可能引起流行。 创伤性感染主要通过撕裂、擦伤、溃疡、灼伤破损的皮肤或呼吸道以外的黏膜感染。 不良的个人卫生和公共卫生状况均有利于皮肤白喉的传播。 气候温暖有助于本病传播，但它不仅仅限于热带地区，在温暖的气候时也有过大规模的暴发流行。;易感性：人群普遍易感，儿童易感性最高;临床表现;流行特征 （1）实施计划免疫前世界各地均有白喉发生，尤其是温带地区，我国各地均有白喉发生。白喉发病率北方高于南方，城市高于农村。 大规模免疫后由于广泛使用DPT、白喉破伤风类毒素混合制剂（DT）和白类，人群的免疫水平提高，白喉的发病率大幅度下降，流行病学特征也发生了一些改变。 （2）白喉一年四季均可发生，但夏季发病较少。 （3）病死率高，在未使用抗毒素治疗前，病死率高达50%左右，使用 抗毒素后病死率明显下降，但仍维持在5%-15%左右。 （4）白喉为儿童传染病，由于6个月以下的婴儿有母体抗体存在，发病率较低，1-5岁发病最高。广泛推行免疫预防后，患者年龄构成明显向大年龄推移。 ; 二、病原学; 白喉棒状杆菌俗称白喉杆菌，是白喉的病原菌 棒状杆菌属是放线菌属中细胞壁含短链分枝菌酸的菌属，细菌种类较多，除白喉棒状杆菌的致病性最强外，还有假白喉棒状杆菌、结膜干燥杆菌、阴道棒状杆菌、痤疮棒状杆菌等 ，一般统称为类白喉杆菌 。这些菌分别寄生于人鼻腔、咽喉、眼结膜、外阴和皮肤等处，一般无致病性，多为条件致病菌 ;形态与染色;G＋；菌体细长微弯，一端或两端膨大呈 棒状,排列不规则，常呈X、V、L、Y或栅状。; 2、培养特性 需氧或兼性厌氧。最适温度35-37℃，Ph7.2-7.8营 养要求高，在普通培养基上不生长。 常用的几种培养基如下： 吕氏培养基 血细胞琼脂培养基 亚碲酸钾血琼脂培养基 哥伦比亚血琼脂培养基 ;3、生化反应;4、抵抗力;5、致病性致病物质;（1）白喉外毒素 (diphtherotoxin);（2）索状因子 细菌表面的一种毒性糖脂,能破坏细胞的线粒体,影响细胞的呼吸与磷酸化。 （3）K 抗原 细胞壁外面的一种不耐热糖蛋白 ,具有抗吞噬的作用。 有利于细菌在粘膜表面定植。 ; 主要是抗毒素免疫;锡克试验(Schick test)调查人群对白喉的免疫力可用锡克试验（Schick test）进行测定。;7、防治原则-与破伤风类似;7、防治原则-与破伤风类似;治疗 1.抗生素的应用 青霉素、红霉素,不仅能抑制白喉棒状杆菌的感染，也能预防恢复期带菌者的出现。 2.抗毒素 应尽早注射足量白喉抗毒素,注射前作皮肤试验，阳性者进行脱敏治疗。 ;三、微生物学检查法;三、微生物学检查法 白喉棒状杆菌－－检验程序; (一) 标本采集 病人 以无菌棉拭子或无菌棉拭子吸附新鲜配制的亚碲酸钾、甘油盐水保存液从疑似患者咽喉假膜边缘蘸取标本或同时采取鼻咽拭子，放入灭菌试管内同时送检。 带菌者或疑似病人 由于未见到明显的假膜，故应采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物送检。 ;(二) 涂片镜检 用美蓝、革兰染色法或奈瑟染色法染色、镜检。镜检如果发现革兰氏阳性菌，形态典型，并有异染颗粒，可初步报告“检出形似白喉棒状杆菌”，结合临床做出初步诊断 ;革兰氏染色;革兰氏染色的基本步骤;革兰氏染液;关键点： 1、载玻片要洁净无脂，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，菌膜宜薄，切忌过厚。 2、在染色过程中，不可使染液干涸。 3、严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度，则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌。 4、菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间很长，或已死亡及部分自行溶解了，都常呈阴性反应。 ; (三) 分离培养 常用的几种培养基如下： 吕氏培养基 血细胞琼脂培养基 亚碲酸钾血琼脂培养基 哥伦比亚血琼脂培养基 ;吕氏血清斜面 将标本接种于吕氏血清斜面上，37℃培养至8-12h，可见灰白色小菌落 为快速诊断，可在吕氏血清斜面培养基培养6-12h后，用培养物做涂片、镜检，检出率比直