色谱1理论ppt课件.pptVIP

主讲教师：姚彤炜,吴永江 浙 江 大 学 药 学 院 2007.9?11;教学进度与课程安排;时间;第一章???色谱基础理论;色谱法的分类 ;按色谱过程的分离机制分类 ;离子交换色谱（ion exchange ~） 利用在离子交换树脂上的交换能力差别。又可分为: 氨基酸分析（aminoacid analysis） 离子色谱法（ion chromatography） 亲合色谱（affinity ~） 将生物活性配位基（酶、辅酶，抗体等）键合到载体表面形成固定相，利用亲合力大小进行分离(专用于蛋白质等生化样品）。;毛细管电色谱（capillary electro- ~） 依靠色谱与电场两种作用力，利用分配系数和电泳速度差别而分离。 毛细管电泳 （capillary electrophoresis） 以高压电场为驱动力，根据样品组分的淌度和分配系数而分离。 手性色谱（chiral chromatography） 利用手性识别原理，用于手性药物的分离分析。;填充柱 毛细管柱;色谱法特点 具有分离、分析功能，可排除组分间的相互干扰，将组分逐个进行定性、定量。发展快，应用广。 色谱法在药物分析中应用 主要用于成分复杂的样品，如：制剂分析、 中成药、天然药物提取分离、合成化合物纯度、有关杂质分析、残留有机溶剂分析、残留农药分析、药代动力学、生物利用度，治疗药浓监测、生物制品药物分析、临床诊断、法医鉴定等。;色谱法发展 向自动化、联用型、人工智能化方向发展： 色谱-光谱联用 气相色谱-付里叶变换红外光谱 高效液相-紫外吸收光谱 气相色谱-质谱（GC-MS） 高效液相-质谱（ HPLC- MS） 高效液相-付里叶变换红外光谱 超临界流体色谱-质谱 薄层色谱-紫外吸收光谱 毛细管电泳-质谱;色谱-色谱联用 指二种色谱方法的联用，也称二维色谱法。目的是用一种色谱法补充另一种色谱法分离效果上的不足。常见的有： 气相色谱-气相色谱 高效液相-气相色谱 高效液相-高效液相 高效液相-薄层色谱 二维薄层色谱 色谱-色谱联用法可提高分离效果，获取更多的定性分析信息。;血浆中卡维地洛尔非手性/手性色谱分离实验装置 ;Date;热力学理论——塔片理论 是由平衡的观点来研究分离过程，是一种半经验理论，以塔片理论为代表。 动力学理论——速率理论 是从动力学观点，即速度来研究各种动力学因素对柱效的影响，以Van Deemeter方程式为代表。;基本概念 色谱峰（peak）——样品产生的电信号强度对洗脱时间作图。称为流出曲线，浓度 -时间曲线，也称色谱带（band）。 色谱峰有三种形式： 对称峰 拖尾峰（tailing peak） 前延峰（leading peak）;峰形参数： 对称因子（symmetry factor，fs） fs =(A+B)/2A； 或用： 拖尾因子（tailing factor，T）来衡量 T=W0.05h/2d1 T=0.95～1.05(正常峰) T＜0.95(前延峰) T﹥1.05(拖尾峰); T=W0.05h/2d1， 或fs=(A+B)/2A;例1 测得某一物质的色谱峰高为2.55cm, 则其0.05h=0.6275cm, 量取：W0.05h= 0.575cm， 量取：A= 0.285cm 计算T或fs，根据 T=W0.05h/2d1 fs=(A+B)/2A ;一个色谱峰，可用三项参数来描述： 峰高或峰面积——定量 峰位（保留值）——定性 峰宽—— 衡量柱效;基线（base line ）——在操作条件下，检测器中只有流动相通过时的流出曲线称为基线。它反映了仪器的噪音随时间的变化。 噪音（noise ，N）——各种未知的偶然因素引起的基线起伏的现象称为噪音。噪音的大小用噪音带的宽度来描述。;定性参数 保留值 保留时间，保留体积 相对保留值 保留指数;保留值 保留时间（retention time ，tR）——进样开始到组分色谱峰顶点时间间隔。 死时间（dead time ，t0或tM）——流动相通过色谱系统的时间。 t0或tM的测定： GC——用空气峰（热导检测）或甲烷峰（FID）测定 HPLC——溶剂峰前沿出现的时间，或用不被固定相吸附或溶解的组分，如NaNO3（210nm测定）的保留时间。;调整保留时间（adjusted retention time， t?R ）也称为校正保留时间——某组分由于溶解或被吸附于固定相，比不溶解或不被吸附的组分在柱中多停留的时间，即： t?R= tR － t0，在实验条件一定（温度、固定相）， t?R决定组分的性质，故t?R是定性的基本参数。;t’R1; 保留体积（ret