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动物细胞工程—动物细胞与组织培养 烧伤病人图片 异体皮肤移植图片 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体制备 体细胞克隆 细胞核移植 动物细胞工程技术 动物细胞工程的基础 动物细胞培养 1、概念(人教版) 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和繁殖。 讨论 1、动物细胞培养的原理是什么? 2、从动物机体中要取出哪些相关组织?并解释原因。 3、组织分散成单个细胞的方法是什么?其理论依据是什么? 4、动物细胞体外培养需要满足哪些条件? 阅读课本观察图片,简述动物细胞培养的基本过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬浮液 10代 细胞 部分细胞“癌变”,遗传物质改变,无限传代 动物细胞培养不能 最终培养成动物体 50代细胞 原代培养 传代培养 细胞贴壁 剥离、分瓶 细胞株 细胞 细胞系 2、过程 动物细胞生长特性: 细胞贴壁: 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上, 称为细胞贴壁。 要求: 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制: 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。 细胞贴壁过程 3.有关概念: 原代培养:从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代培养。 传代培养:将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养。 细胞株:原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到40~50代,这种传代细胞为细胞株。 细胞系:细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别: 细胞系的遗传物质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,容易传代培养。 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 如何界定原代培养和传代培养;细胞株和细胞系? 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多,细胞就会停止分裂增殖 遗传物质改变 思考讨论 1.动物细胞培养取材时,一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官,请解释原因。 细胞的衰老与动物机体的衰老有着密切的关系,细胞的增殖能力与供体的年龄有关,幼龄动物细胞增殖能力强,有丝分裂旺盛,老龄动物则相反。所以,一般来说幼年动物的组织细胞比老年动物的组织细胞易于培养。同样,组织细胞的分化程度越低,则增殖能力越强,所以更容易培养。 肿瘤组织或细胞 > 正常组织或细胞 拓展---动物组织或细胞培养的难易程度 幼体组织或细胞 > 老龄组织或细胞 分化程度低的组织或细胞 > 分化程度高的组织或细胞 2、人类一般保存的是哪类细胞呢?为什么? 保存10代以内的细胞,因为其生物学特性未发生大的变化,最接近于体内组织或细胞的生长特性,很适合用于药物测试、基因表达等实验研究。 3、在动物细胞培养过程中,为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理? 胰蛋白酶处理动物组织,可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解,获得单个细胞;成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖. ①.植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗? ②.胰蛋白酶的作用是什么呢?由此可说明细胞间的物质是什么成份? ③.细胞膜的主要成份是什么?胰蛋白酶能将细胞消化掉吗? ④.既然胰蛋白酶能将细胞消化掉,那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢?能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗?为什么? 进一步思考: 否 胰蛋白酶水解蛋白质 蛋白质 蛋白质和磷脂 能 注意时间的控制 不能,因为两者的最适PH不同,而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中,根据你所学的知识,认为体外培养细胞应该模拟内环境的哪些内容呢? 动物细胞培养条件: 1、无菌、无毒的环境 (添加一定量的抗生素,定期更换培养液) 2、必须的营养物质 (葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、核酸、嘌呤、嘧啶、激素、生长因子、动物血清等。) 保证细胞顺利的生长增殖 3、适宜的温度 36.5+(-)0.5度 4、充足的氧气和适宜的酸碱度 O2和CO2(95%空气和5% CO2 ) 问题: 1、培养基的类型 (1)天然培养基:营养价值高,成分复杂 (2)合成培养基:成分明确,便于控制试验条件 2、动物细胞培养液的主要
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