原生质体培养与诱变2012ppt课件.pptVIP

第六章;1 原生质体培养;原生质体培养：将细胞去除细胞壁后形成裸露的原生质体，把原生质体放在无菌的人工条件下使其生长发育的技术。 特点： ①比较容易摄取外来的遗传物质，如DNA； ②便于进行细胞融合，形成杂交细胞； ③与完整细胞一样具有全能性，仍可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株：;1.1 原生质体分离纯化 1.1.1 酶解法 一般用植物的体细胞（二倍体细胞）， 采用果胶酶、纤维素酶等酶类对植物细胞壁进行酶解，得到原生质体。 特点： ◆操作简单 ◆分离效果好 ◆细胞基本可保持完整性 ;分离原生质体主要是酶解法  首先要让酶制剂大量地吸附到细胞壁的纤维素上去，因此，一般先将材料分离成单细胞，然后分解细胞壁。采用将酶液减压渗入组织，或将组织切成薄片等方法，都可增加酶液与纤维素分子接触的机会。 酶处理目前常???的多是“一步法”，即把一定量的纤维素酶，果胶酶和半纤维素酶组成混合酶溶液，材料在其中处理一次即可得到分离的原生质体。植物材料须按比例和酶液混合才能有效地游离原生质体，一般去表皮的叶片需酶量较少，而悬浮细胞则用酶量较大。每克材料用酶液10～30ml不等。 由于不同材料的生理特点不同，在研究游离条件时，必须试验不同渗透压浓度的细胞，找出适宜的