及其衍生技术在动物传染病防制中的应用ppt课件.pptVIP

第八讲 PCR及其在疾病防制中的应用; 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）又称体外核酸扩增技术，是利用DNA聚合酶依赖于DNA模板的特性，模拟天然DNA的复制过程，在附加的一对引物之间诱发重复的聚合酶反应。PCR包括DNA模板的变性（denaturation）、引物退火（annealing）及多核甘酸链的延伸（extension）等三个步骤组成的多次重复循环，使末端被引物5′端限定的微量特异性DNA片段成指数形式积累。通过PCR，可以简便、快速地从微量生物材料中获得大量特定的核甘酸片段。 ; PCR于1983年由美国PE-Cetus公司的Kary Mullis等发明，1985年由Saiki等在Science杂志上公开报道，1987年获得专利，Kary Mullis因此获得1993年诺贝尔化学奖。; 聚合酶链反应将靶DNA作为模板，与模板片段两端已知的3′序列互补的两种寡核苷酸为引物，经过模板DNA变性、模板与引物退火结合以及在DNA聚合酶作用下发生引物链延伸，合成与模板链互补的新DNA链。 目的基因的扩增是依据体内DNA的复制过程设计的。根据时间和温度，一个PCR循环可分为三步反应。; 第一步，高温（94~95℃）变性，高温使模板DNA双链间氢键断裂而解