实验五金黄色葡萄球菌检测概述 课件.pptVIP

实验五 乳制品中金黄色葡萄球菌检测;生物学特性---菌体形态及培养特征;生物学特性---菌体形态及培养特征;生物学特性---菌体形态及培养特征;致病性;致病性;分布;流行病学;流行病学;流行病学;耐受力;污染的控制;污染的控制;污染的控制;污染的控制;检测步骤---增菌;检测步骤---分离;检测步骤---分离;检测步骤---分离;检测步骤---鉴定;一、实验目的要求 了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。 掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。 掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。;二、原理 葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。 金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。;三、试剂和仪器 （一）最先准备的器材 规格名称 数量 用途 1、500ml三角瓶 1个 7.5%氯化钠肉汤 2、500ml三角瓶 1个 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 3、250ml三角瓶 4个 制血培养基等 4、10×100mm试管 6支 血浆凝固酶试验 5、1ml移液管 2支 6、10ml移液管 2 支 7、直径为90mm平皿 12套 制血平板、B-P平板 8、250ml量筒 1支 （二）应灭菌的其它器材 剪刀1把 不锈钢汤匙1把 称量纸适量;（三）应制备的培养基 培养基总量 所用容器 7.5%氯化钠肉汤 225ml/瓶1瓶 500ml三角瓶 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 225ml/瓶1瓶 500ml三角瓶 血琼脂 100ml/瓶1瓶 250ml三角瓶 B—P培养基 95ml/瓶1瓶 250ml三角瓶 兔血液 5ml;A.1 10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤;A.2 7.5%氯化钠肉汤;A.3 血琼脂平板;A.4 Baird－Parker琼脂平板;四、实验内容 （一）、增菌培养法 样品处理→→选择性增菌→→选择性平板分离→→血浆凝固酶试验鉴别→→结果报告 ;第一天 样品处理和增菌培养 （一）、样品处理 固体或半固体食品：以无菌操作称取25g样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均 质杯内，于8000r/min均质1～2min，制成1:10样品匀液。 　　液体食品:：用灭菌吸管吸取25mL样品，放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠)，经充分振摇制成1:10样品匀液。 （二）、增菌培养 接种操作：吸取5mL稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中。37°C培养24小时。 培养：放于36±1℃培养24h。 培养结果：在NaCl肉汤中呈混浊生长，胰蛋白胨肉汤中有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长。 ;第二天 接种选择性平板进行分离培养 （一）、接种选择性平板 取增菌液1环，划线接种于血平板或B－P平板。 （二）、培养 放于36±1℃培养24h。;第三天 观察分离结果、镜检、做血浆凝固酶试验 （一）、观察分离结果 结果：金黄色葡萄球菌，在血平板上呈：金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈；在Baird-Parker平板上：菌落为圆形，直径2-3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带，在其外层有一透明圈。 （二）、革兰氏染色、镜检 操作：革兰氏染色→镜检 结果：金黄色葡萄球菌，革兰氏阳性，显微镜下呈葡萄状排列无芽胞，直径0.5-1μm。 （三）、结果报告： 综合形态特征，血平板情况以及血浆凝固酶试验结果，判别检样有否金黄色葡萄球菌作出报告。;金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验;血浆凝固酶试验 (1)取洁净玻片一张，于两端各加兔血浆一滴。 (2)用接种环取金黄色葡萄球菌苔一环，在玻片一端兔血浆中研磨混匀，接种环灭 菌后再取白色葡萄球菌苔一环，在另一端兔血浆中研磨均匀。 (3)观察兔血浆有无凝集现象。;四.检验和控制1．金黄色葡萄球菌的检验　　样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10-1稀释液。　　增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°