转基因动物幻灯课件.pptVIP

　　6 转基因动物; 转基因动物是动物基因工程在医学生物学研究中的突出成果。 近十年来，为分子遗传学、发育生物学、医学遗传学、肿瘤研究及优良经济动物的开发研究等多方面做出了很大的贡献。 ;一、转基因动物的概念 转基因动物(transgenic animal)是指以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物。;严格说，转基因动物有别于嵌合体。;Chimera：来源于一个以上的受精卵 Mosaic：来源于同一个受精卵 ;二、转基因动物的发展历史; 转大鼠生长激素基因的 “超级”小鼠;;世界首只转基因 猴;无父双母小鼠;;世界上首匹“自体克隆马” ;“连连”、“田田”和“云云” ;;;;携带鸡IBDV基因的转基因绵羊 ;携带人mAAT蛋白基因的转基因山羊;“不传播疟疾”的转基因蚊子 ;三、动物转基因的方法;;1、雄原核显微注射法 以单细胞受精卵为靶细胞，利用显微注射技术将构建好的载体DNA直接注射入受精卵的原核，再将接受注射的受精卵移入代孕母体输卵管继续发育获得转基因动物个体。 目前应用较广泛, 最早最经典的方法;;;;;;优点： 外源DNA大小基本不受限制(1-50kb)　　 导入过程直观 整合率高;缺点： 设备昂贵、环节较多　　对操作人员有较高的技术要求　　　低效率（尤其是大家畜） 对卵细胞伤害大，胚胎存活率低 基因整合随机性 转基因沉默;2、胚胎干细胞（ES细胞）法 ES细胞是早期胚胎的内细胞团经过体外培养建立起来的多潜能细胞系。 将携带有外源基因的ES细胞注入到动物的早期胚胎内，可产生嵌合体及转基因动物。 　　;;;在ES细胞上的基因操作： 可以通过逆转录病毒感染、脂质体介导、电穿孔、磷酸钙共沉淀等方法将外源基因导入ES细胞。;;胚胎干细胞法获得转基因鼠;Generating ES Cells;;; 目前，胚胎干细胞介导法在小鼠上应用比较成熟，在大动物上应用较晚。;3、逆转录病毒感染法  将目的基因重组到逆转录病毒（LTR）载体上，制成高滴度病毒颗粒，人为感染着床前后的胚胎（也可直接将胚胎与能释放逆转录病毒的单层培养细胞共同培养以达到感染目的）, 获得转基因动物的方法。　　 P123图6-2;;;缺点： 潜在的致癌性 载体构建较复杂 容纳大小有限 整合率不高 重组逆转录病毒不稳定，可能干扰外源基因的表达 胚胎的自我保护机制对其有抗性;4、体细胞核移植法 将外源基因导入到体细胞中，再将该细胞进行培养，选择其中带有外源基因的细胞进行扩增，用这种细胞的细胞核进行核移植（把体细胞核植入一个去了核的未受精卵中，融合并激活），将重组胚进行体外培养或者植入同步化的代孕动物的输卵管。;;1997年，英国：Wilmut等的克隆羊Dolly 1999年, 中国陈大元： 利用兔的卵母细胞获得种间核 移植的大熊猫胚胎 2000年，美国：转基因牛 ;;世界首只克隆羊多莉 ;;;转人基因公牛与它的孩子们;;; 5、精子载体法 直接以精子为载体的转基因方法。 先将成熟精子与外源ＤＮＡ共培养后，再将成熟的精子与外源DNA进行预培养，使精子有能力携带外源DNA进入卵子中，使之受精，并使外源DNA整合到染色体中。　;;;6、ＹＡＣ法 　　　利用酵母人工染色体(ＹＡＣ)作为载体获得转基因动物的方法。 　　　酵母人工染色体（ＹＡＣ）载体是近年来发展起来的新型载体, 能克隆百万对碱基的大片段ＤＮＡ。 　　　　　　 ;;;四、转基因动物的检测;五、转基因动物的特性;六、转基因动物的意义;七、转基因动物的应用;转基因猪;转基因猪的特点;转基因鱼;不能生育的转基因鱼;转基因观赏鱼;曹谊林;转基因牛乳腺生物反应器的制备流程;;转基因羊;将基因注入受精卵;带有人凝血因子基因的转基因羊(1998);羊奶可治血友病;六、转基因动物研究出现的问题;1、制作转基因动物效率低 这是制约这项技术广泛应用的关键。以显微注射法生产转基因动物为例，小鼠、大鼠、兔、牛、猪、绵羊转基因阳性率分别为26%、44%、15%、0.7%、0.9%、0.9%。;2、基因在宿主基因组中的行为难以控制 转基因随机整合于动物的基因组中，很有 可能引起宿主细胞染色体的插