临床寄生虫学和寄生虫学检验课件（免疫学分子生物学诊断）.ppt

反转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)是为检测生物组织某一基因在某种生理、病理或药物作用下的表达情况而设计的。过去常用的方法是将提取的mRNA做滤膜打点杂交或Northern Blot试验,由于mRNA含量极低,这种方法获得成功的机率很低。而RT－PCR是先将mRNA逆转录成cDNA,再进行PCR扩增,大大提高了其检测的敏感性 反转录PCR 反转录PCR基本原理 以mRNA为模板在反转录酶(如禽骨髓瘤病毒,AMV反转录酶)作用下,用一特异性引物首先合成cDNA,再以cDNA为模板,在DNA聚合酶作用下,用一对特异性引物进行PCR扩增反应。RT-PCR的关键是RNA的反转录。 模板可以是总RNA、胞浆RNA或Poly(A)+RNA,但不能混有DNA及蛋白质,尤其不能被RNA酶污染,因此标本必需经无RNA酶的DNA酶处理 评价与应用:该法是检测生物一定生长发育时期、疾病的某一病理时期或药物治疗后特定基因的表达情况,借以观察某基因对生物、发育,疾病病理过程的影响,以及药物治疗对某基因表达的影响及其治疗效果等。如用RT-PCR检测血吸虫病肉芽肿细胞TGF-β1mRNA的表达,以了解血吸虫虫卵肉芽肿纤维化的病理状况等 反转录PCR评价与应用 锚式PCR(anchored PCR)是在得到某一蛋白质纯品,并已获得其 N端部分氨基酸序列资料,或已了