青海湖裸鲤钙调蛋白磷酸酶calcineurin,cn的克隆、表达、和功能研究-cloning, expression and functional study of calcineurin and cn in qinghai lake naked carp ( cyprinus carpio var.przewalskii ).docxVIP

青海大学硕士学位论文 摘要 I 摘 要 青海湖裸 鲤是分 布于 青海湖及 其周边 流域 的唯一的 经济鱼 类， 在鱼 - 鸟-草地 生态系 统中 处于核心 地位。 开展 青海湖裸 鲤基础 生物 学特征和 适 应低氧 、低温 、高盐 度的分子 机理的 研究 ，有助 于揭示 青海湖 裸鲤的基 本 生命活动 规律， 为该 鱼种的资 源保护 和人 工增殖放 流提供 理论 依据。 为了在基 因功能 研究 中得到可 靠地内 参基 因 ，我们通过RT-PCR和RACE 方法得到 了青海 湖裸 鲤三磷酸 甘油醛 脱氢 酶（Gp-GAPDH）基 因 两种异形 体 的完整编 码序列 ，分 别命名为 Gp-GAPDHα (JX287372)和Gp-GAPDHβ (JX287373)，同时 对于Gp-GAPDHα和 Gp-GAPDHβ在 不同的 组织 和受精卵 发 育不同阶 段的表 达量 进行研究 ，发现Gp-GAPDHα与Gp-GAPDHβ 在青海湖 裸 鲤不同组 织和受 精卵 发育不同 阶段表 达量 存在较大 差异 ，尤 其 Gp-GAPDHβ 在受精卵 发育不 同阶 段差异显 著 。初步 断 定 Gp-GAPDHβ不 适合 作为参照 基 因，而Gp-GAPDHα表 达稳定性 需要进 一步 研究，选择其 作为参 照基因需 谨 慎。 钙调蛋白 磷酸酶 （ CN），是由 催化亚 基（ CN A）和 调节亚 基（ CN B） 组成的异 二聚体 的蛋 白酶，它在多 项生理 过程中发 挥重要 作用 ，是一 个多 功能的信 号酶， 它可 被Ca2+和钙调蛋 白所 激活。 我们从青 海湖 裸鲤鳃 组织 通过RT-PCR和RACE方法克隆得 到了CN A的 两个旁系 同源体 （ GpCAα and GpCAγ） 基因序 列以 及 CN B序列，通 过real time方法研 究了 其在胚胎 发 育不同阶 段和盐 度适 应过程中 的表达 模式 ，同 时通过 免疫组 化 方法确定 了 其在肾脏 、心脏 、脑 子、精巢 和鳃 等 不同 组织中的 分布特 征 。 结果发现 ， 青海湖裸 鲤卵细 胞受 精后，GpCAα、GpCAγ和GpCB三 种基因 都 在胚胎发 育 中持续性 表达， 同时 表现为先 降后升 的趋 势 ，GpCAα和 GpCB在 神经胚期 表达量达 到最小 ，相 比之下，GpCAγ则在 原肠胚期 表达量 最少 。在盐度 的 适应过程 中 ，GpCAα和GpCAγ表达 量随着 盐度的逐 渐升高 而升 高，而 GpCB II 表达量在 胁迫初 期升 高之后 却 有下降 的趋 势。通过免 疫组织 化 学方法确 定 了CN在青 海湖裸 鲤肾 、心脏、 脑子、 精巢 和鳃丝中 特殊位 置存 在表达。 通过此次 研究可 以推 测，CN在青海 湖裸鲤 胚胎发育 、盐 度 胁迫 适应过 程及各组 织功能 维持 中 起着重 要的作 用。 研究结果 为进一 步了 解 CN 的 作 用及其机 理提供 了基 本资料 ，同 时为青 海 湖裸鲤的 增殖放 流工 作起着指 导 作用。 关键词： 青海湖 裸鲤 ； 钙 调蛋白 磷酸酶 ； 旁 系同源 体； 内参基因 ； 胚胎发育 青海大学硕士学位论文 Abstract  PAGE 6 Abstract Gymnocypris przewalskii(naked carp), the unique economic fish species distributed in Qinghai Lake on Qinghai-Tibet Plateau, plays a key role in the ecosystem composed mainly of fish, birds and meadow. Research concerning Gymnocypris przewalskii biological characteristics and molecular mechanism adapted to hypoxia, hypothermy and salinity stress will contribute to discovering the basic regular pattern of vital activity and provide theory to conservation and artificial reproduction of this species. In order to evaluate the dependability of GAPDH as a reference gene , two complemented cDNA sequences of glyceraldehyde-3