慢性牙周炎患者龈沟液中mcp1的动态检测及其与碱性磷酸酶相关关系的研究-dynamic detection of mc p1 in gingival crevicular fluid of patients with chronic periodontitis and its relationship with alkaline phosphatase.docxVIP

上海交通大学硕士学位论文 上海交通大学硕士学位论文 - - PAGE 10 - 表达，而且主要通过核转录因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)等与 mcp-1 基因调控 区相应位点的结合在转录水平上调控其表达水平[12]。MCP-1 能够募集炎症免疫相关 的多种细胞至炎症部位，同时诱导单核细胞表达黏附分子和释放多种细胞因子，并 刺 激 嗜 碱 性 粒 细 胞 释 放 组 胺 ， 诱 导 嗜 碱 性 粒 细 胞 释 放 碱 性 磷 酸 酶 （ Alkaline phosphatase，ALP），从而在炎症性微环境的形成中发挥重要作用[13]。 MCP-1 与牙周炎相关关系的研究报道较少，国内朱小玲[14]等最初于 1999 年在 快速进展性牙周炎的牙龈组织中发现了 MCP-1 蛋白的高表达，随后，Garlet[15]等于 2003 年通过 RT-PCR 方法在慢性牙周炎的牙龈组织检测到了 MCP-1mRNA 的高表 达，Lee[16] 等于 2004 年进一步在慢性牙周炎患者的龈沟液中检测到了高浓度 的 MCP-1 蛋白分泌颗粒，然而，对于 MCP-1 在牙周基础治疗前后的动态变化情况及 其与牙周临床指标间的相关关系未见研究，对 MCP-1 引起牙周组织破坏的可能分子 机制亦未见报道。因此，本研究拟通过酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测慢性牙周炎患者基础治疗前后龈沟液中 MCP-1 的动态变化及其 与各牙周临床指标、碱性磷酸酶的相关性，尝试通过对 MCP-1 和 ALP 的动态变化 及相关性的研究，深入了解 MCP-1 在牙周炎发生发展中的作用，为慢性牙周炎的临 床防治及病情检测提供新的思路。 材料与方法 1 材料 1.1 研究对象 采用分组对照的方法：选取我科门诊就诊的慢性牙周炎患者 30 例，男 14 例， 女 16 例，年龄 32～58 岁(平均 46.2 岁)，受试者无全身系统性疾病，无口腔黏膜病， 半年内未做过任何牙周治疗，测定牙无龋洞； 3 个月内未服用过任何抗菌药物、镇 静剂及免疫抑制剂，妇女未妊娠。正常对照组为健康人男性 5 例，女性 5 例，年龄 28～55 岁(平均 43.7 岁)，全口牙龈组织无红肿，无牙周疾病，探诊不出血，探诊深 度在 2mm 以内，摄片无牙槽骨吸收。 1.2 主要试剂 人MCP-1 ELISA试剂盒：上海晶美生物工程有限公司 人碱性磷酸酶EILSA试剂盒：上海晶美生物工程有限公司 无菌生理盐水：上海交通大学附属第一人民医院中心试验室提供 1.3 主要仪器设备 -20℃冰箱：三洋Medical Freezer，日本 -80℃冰箱：三洋Medical Freezer，日本 37℃恒温箱：DHP030，上海跃进医疗器械厂 电子天平：HANGPINGFA2004 ，上海跃进医疗器械厂 离心机：Eppendorf Centvifuge 5417c，德国 滤纸条： Waterman，英国 酶标仪：美国Bio-Rad公司 2 实验方法 2.1 牙周检查 在正常对照组和慢性牙周炎组每个受试者均选取两个牙（一个单根牙和一个第 一磨牙），记录菌斑指数(plaque index，PLI)、探诊深度(probing depth，PD)、附着 丧失(clinic attachment lost，CAL) 、牙龈指数(gingival index，GI)等临床指数。 1）菌斑指数[17,18]：采用镰形牙科探针，检查前经漱口，吹干牙面，对 4 个面 检查，即近中、远中、颊（ 唇）和舌面。按记分标准记录，每个人的记分为所有受 检查牙面记分的平均值。 0：近牙龈区无菌斑； 1：近牙龈区牙面上肉眼视诊无菌斑，探针尖划过时可刮出菌斑； 2：龈缘或邻近的牙面上有中等量的菌斑； 3：龈沟内和（或）龈缘及邻近牙面有大量菌斑； 2）牙周探诊深度[19]：用牙周探针以 20-25g 的探诊压力沿牙长轴分别在两个牙 的 6 个位点（颊侧近中、颊侧中央、颊侧远中、舌侧近中、舌侧中央、舌侧远中） 进行探查，测量并记录袋底至龈缘的距离，求平均值。 3）临床附着丧失[19]：用牙周探针测量并记录釉牙骨质界到牙周袋底的距离， 得出临床附着丧失程度。记录 6 个位点的 CAL 值，求平均值。 4）牙龈指数[20]：将牙周探针的尖端轻轻接触牙龈边缘，观察出血情况，记录 6 个位点的 GI 值，求平均值。牙龈指数记录以 0 到 3 级记分： 0 为正常牙龈； 1 为牙龈略有水肿，探针探之不出血； 2 为牙龈略有水肿，探针探之出血； 3 为有自发出血倾向或溃疡形成。 2.2 牙周基础治疗 对慢性牙周炎组行牙周基础治疗，包括 ：全口龈