全反式视黄酸通过rarγ蛋白调控pparγ2蛋白抑制骨髓间充质干细胞成脂分化-total trans retinoic acid regulates ppar γ 2 protein through rar γ protein to inhibit adipogenic differentiation of bone marrow mesenchymal stem cells.docxVIP

重庆医科大学硕士研究生学位论文 万方数据 英汉缩略语名词对照 英文缩写 AAV英文全称 adeno-associated virus中文全称 腺相关病毒AP-1 atRAactivator protein-1 All-trans retinoic acid转录激活蛋白-1 全反式视黄酸BMSCsBone marrow mesenchymal骨髓间充质干细胞stem cellsCo-IPco-immunoprecipitation免疫共沉淀DBDs C/EBPα/β/δ Glut4 HATDNA binding domains CCAAT/enhancer binding protein α/β/δ Glucose transporter protein4 histone acetyltransferaseDNA 结合区域 CCAAT 增强子结合 蛋白 α/β/δ 葡萄糖转运蛋白 4 组蛋白乙酰化转移酶HDAChistone deacetylase组蛋白去乙酰化酶MEFsMouse embryonic fibroblasts小鼠胚胎成纤维细胞PPARγ2Peroxisome过氧化物酶体增殖proliferators-activated receptor激活受体 γ2 PTGSγ2 posttranscriptional gene 转录后基因沉默的silencing现象RARetinoic acid视黄酸RAREsRetinoic acid response elements视黄酸反应元件RARsRetinoic acid receptors视黄酸受体RARα/β/γ RNAi RXRsRetinoic acid receptor α/β/γ RNA interference Retinoid X Receptors视黄酸受体 α/β/γ RNA 干扰 类视黄醇受体RXRα/β/γ VARetinoid X Receptor α/β/γ Vitamin A类视黄醇受体 α/β/γ 维生素 A 1  TFtranscription factor转录因子NRNuclear receptor核受体 2  全反式视黄酸通过 RARγ 蛋白调控 PPARγ2 蛋白抑制 骨髓间充质干细胞成脂分化 摘要 目的：研究全反式视黄酸（All-trans retinoic acid, atRA）抑制大鼠 来源的骨髓间充质干细胞（rBMSCs）成脂分化过程中，视黄酸核受体 γ（RARγ）对过氧化物酶体增殖激活受体 γ2（PPARγ2）、CCAAT 增强 子结合蛋白 α（C/EBPα）调控的机制。 方法：取 18d 左右的 SD 幼鼠，经体外分离、培养、再成脂诱导 rBMSCs。成脂分化诱导液中，分别加入 0.5、1.0 μmol/L atRA 持续作 用 15d 后，取六孔板细胞提取 RNA，Real-time PCR 检测三个处理组（0、 0.5、1.0 μmol/L atRA）细胞的 RARγ、C/EBPα、PPARγ2 的 mRNA 表 达水平；分别加入 1.0、5.0 μmol/L atRA 持续作用 15d，取六孔板细胞 提取总蛋白，Western-blot 检测三个处理组（0、1.0、5.0 μmol/L atRA） 细胞 RARγ、C/EBPα、PPARγ2 的蛋白表达水平。重组腺病毒过表达 RARγ（over-RARγ）、沉默 RARγ（si-RARγ）分别感染 BMSCs，采用 Real-time PCR 及 Western-blot 检测 RARγ、C/EBPα、PPARγ2 的 mRNA 及蛋白水平。Co-IP 检测 1.0 μmol/L at-RA 持续成脂诱导 BMSCs15d 后， 取两处理组培养皿细胞，按照相关步骤，提取蛋白，Western-blot 免疫 印迹显示结果，明确 RARγ 与 PPARγ2 两者之间是否有相互作用。 结果：（1）视黄酸信号通路 RARγ 的表达水平：Real-time PCR 显 3  示：在诱导 15d 结束时，与对照组相比，加入 0.5、1.0 μmol/L atRA 后， RARγ 表达明显增加(P＜0.01, P＜0.001)，且呈浓度依赖性。Western-blot 结果显示：在诱导 15d 结束时，与对照组相比，加入 1.0、5.0 μmol/L atRA 后，RARγ 表达明显增加(P＜0.01, P＜0.001)，同样也呈浓度依赖性。 过表达 RARγ 组：RARγ mRNA 和蛋白均较对照组明显增加(P?0.01)。