温肾健脾法对溃疡性结肠炎模型大鼠血清il-8 结肠组织nf-κbp65 il-1βmrna表达影响的研究-effect of warming kidney and strengthening spleen method on expression of nf - κ bp65 il - 1β mrna in serum il - 8 colon tissue of ulcerative colitis model rats.docx

温肾健脾法对溃疡性结肠炎模型大鼠血清 温肾健脾法对溃疡性结肠炎模型大鼠血清 IL-8、结肠组织 NF-κBp65、IL-1β mRNA 表达影响的研究 PAGE 1 PAGE 1 万方数据 中 文 摘 要 目的 1、阐明脾肾阳虚证型是 UC 的重要证型，温肾健脾法及其代表方四神丸是治疗复 发型、难治型 UC 的重要治法、方药。 2、初步阐释温肾健脾法及其代表方四神丸调控 UC 模型大鼠肠黏膜修复的作用机 制，为用温肾健脾法治疗 UC 提供科学依据。 方法 采用“病—证结合”的方法（番泻叶浸液灌胃+糖皮质激素腹腔注射+TNBS/乙醇混 悬液灌肠）制备脾肾阳虚证 UC 模型大鼠。之后采用高、中、低三种不同剂量的四神丸 进行干预治疗 21 天，同时以 SASP 作为阳性对照药物进行治疗。取材后，采用病理学 方法（肉眼观察结肠组织大体形态并评分、HE 染色镜下观察肠黏膜损伤及修复情况） 观察大鼠结肠组织修复情况、ELISA 法检测大鼠血清 IL-8、SP 法和 qRT-PCR 法分别检 测大鼠结肠组织中 NF-κBp65、IL-1β的表达。 结果 1、ELISA 法检测大鼠血清 IL-8 表达：与空白组比较，模型组大鼠血清 IL-8 含量显 著增高（P0.01）；治疗后，与模型组比较，对照组、四神丸低、中、高剂量组大鼠血 清 IL-8 含量均显著降低（P0.01）。 2、SP 法检测大鼠结肠组织 NF-κBp65 表达：（1）镜下可见：空白组 NF-κBp65 阳 性细胞呈阴性表达，模型组 NF-κB65 阳性细胞呈胞浆阳性，阳性细胞为单核-巨噬细胞， 散在浸润于黏膜下层、淋巴滤泡内及外膜层，呈中等强度至强阳性表达。其余各治疗组 大鼠 NF-κB65 阳性细胞均成呈弱度至中等强度表达。（2）NF-κB65 阳性细胞平均灰度 值结果显示：与空白组比较，模型组 NF-κB65 表达显著增强（P0.01）；治疗后，与模 型组比较，对照组、四神丸中、高剂量组 NF-κB65 表达显著减弱（P0.01）。 3、RT-qPCR 法检测大鼠结肠组织 IL-1β mRNA 表达：与空白组比较，模型组 IL-1β mRNA 表达显著增强（P0.01）；治疗后，与模型组比较，对照组、四神丸中、高剂量 组 IL-1β mRNA 表达显著减弱（P0.05）。 结论 1、四神丸降低了 UC 模型大鼠血清中 IL-8 的表达，抑制了导致机体炎症反应的活 性产物的释放，从而减弱了机体炎症反应。 2、四神丸降低了 UC 模型大鼠结肠组织中 NF-κBp65 的表达，终止了相关炎症反应 基因的转录，使炎症免疫细胞增殖及细胞凋亡减少，从而起到抑制炎症免疫反应的作用。 3、四神丸降低了 UC 模型大鼠结肠组织中 IL-1β的表达，阻碍了中性粒细胞向病变 结肠部位的募集和趋化，减少了肠黏膜的损伤，从而有效地促进大鼠肠黏膜的修复，最 终达到治疗疾病的作用。 关键词：UC；温肾健脾法；脾肾阳虚型； IL-8 ；NF-κBp65；IL-1β ABSTRACT Objective Clarify the spleen kidney Yang deficiency syndrome is the most important syndrome in UC , the method of warming kidney and invigorating spleen is important treatment , and it’s on behalf of the Sishen Wan is important Chinese herbal medicine on curing recurrent and refractory UC. Preliminary interpret the mechanism of UC model rats’ intestinal mucosa repair about the method of warming kidney and invigorating spleen and it’s on behalf of the Sishen Wan . Provide a scientific basis for the method of warming kidney and invigorating spleen cures UC. Method Adopt the method of “combined disease-and-syndrome” (Fenxieye gavage + glucocorticoid intraperitoneal injection + TNBS/ethanol mixed suspension clyster)