细粒棘球蚴重组抗原14-3-3和苹果酸脱氢酶诱导宿主dc-cd4t细胞免疫应答机制的研究-study on immune response mechanism of host dc - cd4t cells induced by recombinant antigen 14 - 3 - 3 and malate dehydrogenase of echinococcus granulosus.docxVIP

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  • 2018-08-07 发布于上海
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细粒棘球蚴重组抗原14-3-3和苹果酸脱氢酶诱导宿主dc-cd4t细胞免疫应答机制的研究-study on immune response mechanism of host dc - cd4t cells induced by recombinant antigen 14 - 3 - 3 and malate dehydrogenase of echinococcus granulosus.docx

细粒棘球蚴重组抗原14-3-3和苹果酸脱氢酶诱导宿主dc-cd4t细胞免疫应答机制的研究-study on immune response mechanism of host dc - cd4t cells induced by recombinant antigen 14 - 3 - 3 and malate dehydrogenase of echinococcus granulosus

万方数据 万方数据 宁夏医科大学学位论文独创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立进 行研究工作所取得的成果,无抄袭及编造行为。除文中已经特别加以注明 引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品 成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式 标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 论文作者签名_____ 论文导师签名_____ 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大学关于学位论文使用授权的声明 宁夏医科大学有权保留使用本人学位论文,同意学校按规定向国家有 关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授权宁 夏医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检 索,可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。可以公 布(包括刊登)论文的全部或部分内容。 (保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名_____ 论文导师签名_____ 年 月 日 年 月 日 宁夏医科大学硕士研究生学位论文中文摘要 宁夏医科大学硕士研究生学位论文 中文摘要 细粒棘球蚴重组抗原 14-3-3 和苹果酸脱氢酶诱导宿主 DC-CD4+T 细胞免疫应答机制的研究 摘 要 目的: 通过比较不同免疫保护力的细粒棘球蚴重组抗原 14-3-3(rEg14-3-3)和线粒体苹 果酸脱氢酶(rEgmMDH)对宿主树突状细胞(dendritic cell,DC)的成熟、DC 细胞 递呈并促进 CD4+T 细胞活化、分化及效应的影响,研究细粒棘球蚴抗原所诱导的宿主 免疫应答机制。 方法: 1.抗原的获取:①重组抗原的表达:通过原核表达以及亲和层析纯化获得细粒棘 球蚴重组抗原 rEg14-3-3 和 rEgmMDH,并复性获取可溶性蛋白 rEgmMDH;②天然粗 抗原的制备:外科手术剥离细粒棘球蚴病人的包囊并无菌收集囊液和分离原头蚴,原 头蚴经液氮研磨和超声破碎获取可溶性抗原。 2.小鼠骨髓来源的 DC(BMDC)的制备和培养:无菌分离小鼠骨髓细胞,通过 GM-CSF、IL-4 定向培养 7 天,获取未成熟 DC。 3. 不同抗原刺激 BMDC 的扫描电镜及流式细胞术检测: LPS 、 rEg14-3-3 、 rEgmMDH、原头蚴粗抗原和囊液分别刺激未成熟 BMDC 48 小时,扫描电镜观察各组 BMDC 表面形态特征,流式细胞术检测各组 BMDC 的表面分子(MHCⅡ、CD40、 CD80 和 CD86)和极化因子(IL-12 和 CCL2)的表达水平。 4.混合淋巴细胞反应(MLR)及流式细胞术检测:无菌分离正常小鼠脾脏单个淋 巴细 胞 , 通过 磁 珠 分选 分 离纯 化 小 鼠脾 脏 初始 CD4+T 细胞。 LPS 、rEg14-3-3、 rEgmMDH、原头蚴粗抗原和囊液刺激培养的 BMDC 分别与初始 CD4+T 细胞按 1:5 的 比例混合培养 5 天。流式细胞术检测混合淋巴细胞反应(MLR)后 Th1,Th2,Th17 和 Treg 细胞占 CD4+T 细胞的比例。 II 结果: .获得高纯度的可溶性重组抗原 rEg14-3-3 和 rEgmMDH,以及无菌的囊液抗原和 原头蚴可溶性抗原。 .①扫描电镜观察结果显示 LPS、rEg14-3-3、rEgmMDH、SPA 和 HF 抗原刺激的 DC 细胞均有部分分化为具有树突状突起的 DC。②流式细胞术检测各组抗原刺激 BMDC 的结果显示,与 PBS 相比,相应浓度的 LPS、rEg14-3-3、rEgmMDH、原头蚴 可溶性抗原和囊液均能刺激 BMDC 高表达 MHCⅡ类分子和 CD40(P<0.05)。与 PBS 相比,BMDC 在相应浓度的 LPS、rEg14-3-3、原头蚴可溶性抗原刺激后,可高表达 CD80 和 CD86(P<0.05),而相应浓度的 rEgmMDH 刺激的 BMDC 低表达 CD80(P >0.05),相应浓度的囊液刺激的 BMDC 低表达 CD86(P>0.05)。③比较分析 rEg14-3-3 组和 rEgmMDH 组 BMDC 表面分子的表达水平,经抗原 rEg14-3-3 刺激后的 BMDC 较高水平表达 MHCⅡ类分子、CD80 和 CD86(P<0.05)。④相应浓度的 LPS 和 rEgmMDH 能刺激 DC 表达较高水平的极化因子 IL-12(P<0.05),相应浓度的 rEg14-3-3 和囊液能刺激 DC 表达较高水平的极化因子 CCL2(P<0.05)。 .流式细胞术分析混合淋巴细胞反应后的 CD4+T 细胞,结果显示,①与 PBS 相 比, LPS 、 rEg14-3-3 和 rEgmMDH 能 诱 导 初 始 CD4+T 细 胞 分 化

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