胃癌幽门螺杆菌l型感染与肿瘤增殖关系的分析-relationship between helicobacter pylori l - type infection and tumor proliferation in gastric cancer.docxVIP

胃癌幽门螺杆菌L型感染与肿瘤增殖关系的研究中文摘要目的：研究幽门螺杆菌L型（helicobacterpyloriL-form，Hp-L型）感染对胃癌增殖的影响及其在胃癌发生中的作用，探讨其机制。方法：（1）用胃癌BGC-823细胞与幽门螺杆菌L型分别以1：20、1：100、1：500共培养，在不同时段进行以下实验。①应用倒置光显微镜观察胃癌BGC-823细胞形态学变化；②应用四甲基噻唑氮蓝（MTT）法检测细胞生长增殖率；③应用流式细胞仪（FCM）检测细胞周期；④应用免疫组化法（SP法）检测胃癌BGC-823细胞的癌基因（skp2）、抑癌基因（p53）的表达和核增殖指数（Ki-67）的表达情况；⑤应用原位杂交法检测胃癌BGC-823细胞的癌基因（skp2）的表达情况。（2）收集慢性萎缩性胃炎、胃肠腺化生、胃不典型增生、胃腺癌各40例，以40例慢性浅表性胃炎（轻度）作为对照。①应用革兰染色和免疫组化（SP法）检测其Hp-L型的感染情况；②应用免疫组化法（SP法）和原位杂交法检测上述组织的癌基因（skp2）的表达，以及核增殖指数（Ki-67）和p53等蛋白的表达情况，分析比较Hp-L型阳性的病变各组与对照组的关系，以及病变各组的Hp-L型阳性与skp2、Ki-67和p53表达阳性的相关性，分析其意义，进一步探讨Hp-L型感染对胃癌增殖影响及其在胃癌发生中的作用。结果：①倒置显微镜下，见正常情况下胃癌BGC-823细胞生长较好，表现为不规则多边形，贴壁生长，可融合成集落。将Hp-L型加入细胞后，细胞分裂增多，增殖旺盛，瘤巨细胞增多，出现明显的生长加速现象，且随着Hp-L型浓度和作用时间的增加，上述表现越明显，存在细菌浓度和作用时间的依赖性。②MTT法测定细胞生长增殖率的生长曲线显示，Hp-L型对胃癌BGC-823细胞生长增殖有促进作用，在24h增殖最显著，随着作用时间的延长和细菌浓度的增大，其促进作用明显，与对照组比较有统计学意义(P0.001)。③FCM检测可见，Hp-L型影响胃癌BGC-823细胞周期的分布，使G0/G1期比例降低，S期比例升高，各组之间差异有统计学意义(P0.05)。④细胞爬片的原位杂交和免疫组化染色可见随着细胞/细菌比例的增加和培养时间的延长，胃癌BGC-823细胞Skp2的mRNA和蛋白表达和Ki-67、p53蛋白表达阳性细胞数逐渐增加，与对照组之间差异有统计学意义（P0.05）,各组之间比较差异也有统计学意义（P0.05）。⑤慢性萎缩性胃炎、胃肠腺化生、胃不典型增生和胃癌组织的Hp-L型阳性率分别为22.50%、40.00%、65.00%和55.00%，除胃癌组外其它病变组Hp-L型阳性率呈逐渐增高趋势。病变各组与对照组的阳性率（15.00%）相比具有统计学意义（P0.05）。观察革兰染色切片发现，Hp和L型在病变组织中可聚集成堆，亦可散在分布。癌巢的坏死处几乎无L型，正常组织内较少见。在L型阳性的切片上均可见到其粘附于病变组织细胞表面的现象。Hp为革兰染色阴性，呈红色，L型大部分为革兰染色阴性呈红色，少数为革兰染色阳性。Hp的细菌形态呈螺旋形、“S”形或海鸥形；L型的细菌形态呈多形性：有圆球体、原生小体、巨形体、杆状体和丝状体等，但多数为圆球体。⑥慢性萎缩性胃炎、胃肠腺化生、胃不典型增生和胃癌中的Hp-L型阳性组的Skp2mRNA和蛋白表达阳性率与对照组相比均具有统计学意义（均P0.05）。且病变各组的Hp-L型阳性与Skp2mRNA和蛋白表达阳性呈正相关(r=0.90,r=0.90,均为P0.05)。上述病变各组Hp-L型阳性组的Ki-67蛋白表达阳性率与对照组相比均具有统计学意义（P0.05）。且病变各组的Hp-L型阳性与Ki-67蛋白表达阳性也呈正相关(r=0.87,P0.05)。⑦p53蛋白在慢性浅表性胃炎不表达，但上述病变各组Hp-L型阳性组的p53蛋白表达阳性率与对照组相比均具有统计学意义（P0.05）。且病变各组的Hp-L型阳性与p53蛋白表达阳性也呈正相关(r=0.90,P0.05)。结论：1．Hp-L型促进胃癌细胞BGC-823的生长和增殖，存在时间和剂量依赖性。2．Hp-L型改变胃癌细胞BGC-823的细胞周期分布，使进入S期的细胞增多，从而促进胃癌细胞的增殖，也存在时间和剂量依赖性。3.Hp-L型感染可能在慢性萎缩性胃炎→肠上皮化生→非典型增生→胃癌这一演变过程中起着重要作用，从而与胃癌的发生相关。4.Hp-L型感染促进胃癌细胞生长和增殖机制可能涉及上调Skp2、Ki-67和p53的表达。关键词：幽门螺杆菌；L型；胃癌细胞BGC-823；MTT法；流式细胞仪；免疫组织化学；原位杂交；Skp2；Ki-67；p53。Investigationoftherelationshipbetwee