不同温度和PH培养条件下对枯草杆菌的提纯优化论文实验步骤.doc

柳州职业技术学院 毕业设计 题目：不同温度和PH培养条件下对枯草杆菌的提纯优化 姓名： 学号： 专业：食品检测及管理 年级：2009级 时间：2011年11月 指导老师： 实验合作者： 时间：2011年 11 月 柳州职业技术学院毕业设计（论文） 任 务 书 基础部 系（部） 食品检测及管理专业 2 班学生 学号 一、毕业设计（论文）题目：不同温度和PH培养条件下对枯草杆菌的提纯优化 二、毕业设计（论文）工作规定进行的日期：200 年 月 日起至 200 年 月 日 三、毕业设计（论文）进行地点： 学校图书馆 上网查资料 四、任务书的内容： 目的： 通过此次实验对枯草杆菌有了一个深入的理解，懂得如何根据实际情况培养得出纯种枯草杆菌，会科学地挑选生长环境因素，并在此基础上进行实验，得出结论，找出最佳生长环境，写出对结果的分析。 任务： （1）上图书馆查阅微生物方面的科学杂志30-40篇，记录各篇论文的作者、题目、杂志名称、出版地点、时间及页码（如有摘录千万不能弄错是从哪篇文章摘录的） （2）确定一篇论文作为自己的研究起点，查阅该篇论文的参考文献，理出该研究的前因后果 （3）依据上述工作确定自己的课题，选择合适的实验设计方案 （4）填入模拟数据，进行模拟分析 不同温度和PH培养条件下对枯草杆菌的提纯优化 摘要】：本文根据实验操作 ,针对枯草杆菌生长环境的选着，通过对培养基的PH值、生长温度的选择进行实验研究 ,得出最佳的生长环境。 绪论：枯草杆菌是非致病菌细菌，对人畜无害，不污染环境，是好氧的阳性菌，①而且很多学者的研究证明动物饲喂芽孢杆菌后，能显著降低肠道大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌的数量，使机体内的有益菌增加而潜在的致病菌减少，因而排泄物、分泌物中的有益菌数量增多，致病性微生物减少，从而净化了体内外环境，减少疾病的发生。氨、胺、吲哚、硫化氢等物质在肠道粘膜对细胞有明显的毒害作用，芽孢杆菌抑制了有害微生物，进而减少有害物质产生，有利于动物健康和生长。②根据（士论文-枯草芽孢杆菌XM16菌株抗真菌蛋白的分离纯化及性质结构研究）中所说‘经过 100℃热处理 30min，活性未丧失’可知 枯草杆菌是十分耐高温的，以此对样品经行预处理。 所以本实验以土壤中的枯草杆菌为对象,观察不同温度和PH值对枯草杆菌的生长的影响。从而得到适合枯草杆菌生长的最佳条件。 实验阶段： 一、准备实验： 1、①仪器：恒温培养箱2个、 培养皿27个、 20ml的吸量管1支、 2ml的吸量管4支、 干燥箱、 高压灭菌锅、 水浴锅、 250ml的烧杯3个、（制作培养基）250ml的锥形瓶3个、200ml的锥形瓶1个、（废液） 洗耳球1个、 试管架1个、 酒精灯1个、 打火机1个、75%的酒精、 200ml的试剂瓶 电炉1个、 3支1ml的吸量管 ②药品：蛋白胨、 牛肉膏、 Nacl、 琼脂、 硫酸、 氢氧化钠 2、玻璃仪器的灭菌：将所需的玻璃仪器洗净，用报纸包好，放到干燥箱125℃灭菌4h。 3、取样：取土壤表层5-10cm下的肥土100g左右，把采得的土壤放入纸袋带回实验室分离。 4、样品处理：称取肥土5g放入含有45ml水的锥形瓶中，摇动片刻，然后将此瓶在无菌实验室中用小火加热至悬浊液沸腾，维持15min。而后静置5min。 5、培养基的配制： ①取蛋白胨2g、 牛肉膏0.6g 、Nacl 1g 、 琼脂3~4g 于250ml的烧杯中，加入200ml的且PH4的蒸馏水，溶解，倒入锥形瓶中。 ②取蛋白胨2g、 牛肉膏0.6g 、Nacl 1g 、 琼脂3~4g 于250ml的烧杯中，加入200ml的且PH6的蒸馏水。溶解，倒入锥形瓶中。 ③取蛋白胨2g、 牛肉膏0.6g 、Nacl 1g 、 琼脂3~4g 于250ml的烧杯中，加入200ml的且PH8的蒸馏水。溶解，倒入锥形瓶中。 6、生理盐水的配制：称取0.85g的食盐200ml的烧杯中溶解，移入100ml的试剂瓶中。 7、湿热灭菌：用棉花塞好装有培养基的3个锥形瓶和装有生理盐水的试剂瓶的瓶口，用报纸包好瓶口。放入高温灭菌锅121℃灭菌20min。 8、无菌室的灭菌：将实验服挂于无菌室，打开无菌操作台的紫外光灯，再打开无菌室的紫外光灯，灭菌1h，在做实验前半小时关闭。 二、实验操作： 1、进入无菌室，用75%的酒精擦拭双手，穿上灭过菌的实验服，将所需玻璃仪器和培养基放入无菌操作台，点上酒精灯。 2、吸取2ml样液到1号试管中，再吸取