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PAGE PAGE 18 实验一 植物核酸提取 一、植物叶片总DNA的大量提取 【实验原理】 CTAB法原理CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂，具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后，加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性； NaCl 提供一个高盐环境，使DNA充分溶解在液相中；? CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离； PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。? 【实验目的】 利用CTAB法从植物叶片组织中提取高质量DNA。 【主要试剂】 CTAB提取缓冲液：1.4M NaCl，100mM Tris pH 8.0，2% CTAB，20mM EDTA，0.5% NaHSO3，2% β-巯基乙醇。室温保存，五年有效。 氯仿：室温保存，五年有效。 无水乙醇：-20℃保存，五年有效。 70%乙醇溶液：将