食管鳞癌组织中核转录因子nf-κb和抑癌基因pten的表达及其意义-expression and significance of nuclear transcription factor nf - κ b and tumor suppressor gene pten in esophageal squamous cell carcinoma.docxVIP

PAGE PAGE 10 前 言 食管癌是我国常见的恶性肿瘤，根据世界卫生组织的报告，全世界约 50％的 食管癌发生在中国，食管癌恶性程度高，5 年生存率仅 20％上下。目前普遍认为 食管癌的高死亡率与食管癌的高侵袭性和转移性关系密切，而肿瘤的侵袭、转移 与肿瘤细胞的黏附性、运动性、细胞外基质降解能力及肿瘤血管形成等相关，目 前研究发现食管癌的病因和发病机制可能与原癌基因激活、抑癌基因失活以及分 化相关基因、细胞凋亡相关基因和肿瘤转移抑制因子异常等有关[1],这些癌基因激 活、抑癌基因及分化相关基因失活或异常表达会引起血管相关因子的异常表达， 进而促进肿瘤血管生成。因此,加强对食管癌特异的分子病理学变化的研究，不仅 有助于阐明其发生、发展的机制,而且更利于指导临床治疗。 核转录因子κB(NF-kb) 是一种具有多向调节功能的转录因子, 能与免疫球蛋 白 k 轻链基因增强子 kb 序列 kkB5 - 23 特意结合, 并促进 k 链基因表达,可调控细 胞增殖、分化、凋亡及恶性转化[2] 。NF-κb/p65 是 NF-κB 的活性成分 ,在肿瘤的 发生、发展中起重要作用。NF-κ B 诱导激酶 (NK-κbinducing kinase, NIK )能与 IκK α和 IκKβ 相互作用,并激活 IκK s 的催化活性。 PTEN基因于1997年先后被国际3个科研小组发现[ 3 - 5 ]。他们从基因蛋白结构 特征、在肿瘤中的突变及调节表达等3个领域进行研究，并分别将其命名为第10号 染色体同源丢失性磷酸酶—张力蛋白基因( phosphatase and tensin homologue deleted chromosome ten, PTEN)，多发性进展期癌突变基因(mutated in multiple advanced cancer, MMAC1) 和由TGF-β1调节的、上皮细胞富含的磷酸酶基因(TGF- βregulated and epithelial cell-enriched phosphatase, Tepl)，通称PTEN基因。PTEN是 迄今为止发现的第一个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,位于第10号染色体 q23.3区,有9个外显子和8个内含子, 5′端有804个核苷酸的非翻译区,其后有长度为 1209 bp的开放阅读框架,编码的PTEN蛋白由403个氨基酸残基组成,主要包括氨基 端磷酸酶区域, C2区域和羧基端区域。PTEN的氨基端与张力蛋白tensin高度同源， 可能通过调节粘着斑而影响肿瘤细胞浸润和转移，其氨基端还具有脂质磷酸酶活 性，这是其作为抑癌基因的主要活性；C2结构域与膜定位有关，具有抑制瘤细胞 的能力；PTEN羧基端含有串联的两个PEST(脯、谷、丝、苏氨酸)序列和一个 PSD295/DLG/Z0-1(PDZ)同源区域结合序列以及多个磷酸化位点，对调节蛋白质的 稳定性的自身酶活性有重要作用。该基因的编码产物PTEN蛋白，是具有蛋白与脂 质磷酸酯酶活性的双特异性磷酸酯酶，作为一种重要的信号分子参与细胞增殖、 分化、黏附、迁移、凋亡以及基因转录的调控，被认为是继Rb，P53后的又一重要 的抑癌基因。目前，发现在多种恶性肿瘤组织和肿瘤细胞系中发现有PTEN基因的 缺失或突变及蛋白表达异常[ 6 ] 。 本研究采用免疫组织化学Elivision法检测食管鳞癌与癌旁正常食管黏膜组织 中NF-kb和PTEN表达情况，并对NF-kb、PTEN阳性表达与食管鳞癌各临床病理指 标间关系进行分析。以探讨两者在食管鳞癌发生发展过程中所起的作用及相互关 系，旨在为食管鳞癌患者的早期诊断、病程分析及预后判断提供有价值的理论补 充。 材料与方法 1 标本来源 69 例食管鳞癌组织标本取自蚌埠医学院第一附属医院 2008 年 7 月至 2009 年 7 月手术切除标本的存档蜡块，均有完整的临床资料和手术记录，术后均有明确的 病理诊断，术前均未放化疗。本组男 41 例，女 28 例；年龄 37～82 岁，中位年龄： 61.5 岁；本组60 岁 29 例，≥60 岁 40 例；分化程度：高分化 16 例，中分化 32 例，低分化 21 例；按照 1997 年国际抗癌联盟（UICC）制定的食管癌 TNM 分期 标准：Ⅰ期 20 例、Ⅱ期 27 例、Ⅲ期 22 例；有淋巴结转移 40 例，无淋巴结转移 29 例，同时选取 26 例距肿瘤边缘 5cm 以上的正常食管组织作为对照组。 2 主要试剂 (1) 兔抗人NF-kB P65多克隆抗体 ( 福州迈新生物技术开发公司 ) (2) 鼠抗人PTEN多克隆抗体 ( 福州迈新生物技术开发公司 ) (3) EliVisionTM plus KIT-9903（A、B）