AMPK活化对骨骼肌中MAFbx mRNAMuRF1 mRNA表达和3MH含量影响.docVIP

AMPK活化对骨骼肌中MAFbx mRNAMuRF1 mRNA表达和3MH含量影响 　　摘要：通过给sD大鼠注射AMPK激动剂AICAR，提高大鼠骨骼肌中AMPK的活性，探讨AMPK活性变化对骨骼肌蛋白质降解的作用。采用同位素技术测定腓肠肌中AMPK活性的变化；采用实时荧光定量PCR技术，测定腓肠肌中MuRFl、MAFbx基因表达量的变化。结果显示AICAR注射后l、2、7 h，AMPK活性与对照组相比升高，差异有显著性或非常显著性意义(P0.05或P0.01)；AICAR注射后7 h，AMPK活性开始下降。AICAR注射后1、2 h，MAFbxmRNA、MuRFl mRNA表达量与对照组相比升高，分别升高2.45、2.23倍和2.67、2.30倍，差异有非常显著性意义(P0.01)；AICAR注射后7 h，MuRFl tuRNA表达量升高了2.01倍，差异有显著性意义(P0.05)；而MAFbxmRNA表达有升高趋势，但差异没有显著性。3-MH质量摩尔浓度各组间差异没有显著性意义。结果说明：(1)大鼠一次性注射AIcAR后，能显著提高骨骼肌中AMPK的活性，AMPK活性的升高能促进MAFbx mRNA和MuRFl mRNA的表达，促进骨骼肌蛋白质的降解；(2)推测在反映骨骼肌蛋白质降解方面，MAFbxmRNA和MuRFl mRNA比3-MH的敏感度要高。 　　关键词：运动生物化学；腺苷酸活化蛋白激酶；泛素蛋白连接酶；3-甲基组氨酸；蛋白质降解：大鼠 　　中图分类号：G804.7　文献标识码：A 文章编号：1006-7116(2010)08-0112-06 　　 　　腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)在真核细胞生物中广泛存在，属丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶。2005年Thomson研究报道AMPK可能抑制骨骼肌蛋白质的合成，其采用老年大鼠和成年大鼠为实验对象，进行机械刺激促使大鼠肌肉肥大，观察到随着年龄增大大鼠快肌肥大情况随之下降，快肌中AMPK活性反而增加；大鼠慢肌纤维随着年龄增大肥大情况没有差异，慢肌中AMPK的活性也没有差异。研究者认为年龄造成的AMPK活性的升高可能是造成快肌肥大程度减弱的原因。 　　泛素蛋白酶体系统是一个主要的蛋白质降解系统，对动物的研究逐渐显示：在肌肉萎缩过程中，泛素蛋白酶体系统促使蛋白质降解。Muscle Ring FingerI(MuRFl)和Atrophy F-box(MAFbx也称为Atrogin-1)均属于泛素蛋白连接酶，是目前发现的与骨骼肌蛋白质分解代谢关系最为密切的泛素蛋白连接酶。有证据表明MuRFl和MAFbx仅在骨骼肌中表达，在肌肉处于分解代谢过程中MuRF1和MAFbx表达增加。目前研究认为MuRF1和MAFbx是骨骼肌蛋白质降解的标志。测定其表达量的变化可反映骨骼肌蛋白质的降解情况。 　　3-甲基组氨酸(3-methylhistidine，3-MH)是一种微量氨基酸，主要存在于骨骼肌的肌动蛋白和肌凝蛋白内(约91.1％)，是组氨酸在形成组氨酰-tRNA后发生甲基化的产物，且蛋白质分解代谢释放的3-MH，不能作为tRNA的底物被重复利用合成肽链，而从尿液中定量排出。因此，测定3-MH的释放量可间接反映肌纤维蛋白的降解率，是追踪骨骼肌蛋白质分解代谢状况的良好指标。3-MH排出增多主要见于外伤、感染等应激情况。有报道在烧伤病人骨骼肌中，观察到3-MH含量升高。2008年检测悬吊引起的肌肉萎缩中，发现悬吊后肌组织间隙渗透的3-MH含量增多44％。 　　有报道运动过程中，AMPK活性显著升高，能抑制蛋白质的合成。而关于AMPK活性升高促进骨骼肌蛋白质的降解研究较少，2007年有报道用5-氨基咪唑-4-甲酰胺核苷酸(5 -aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleoside，AICAR)处理C2C12肌管，观察到基质中3-MH的含量升高和MAFbx mRNA、MuRF1 mRNA的表达，认为AMPK活化刺激了C2C12肌管中肌纤维蛋白的降解。目前，还没有见到在大鼠活体组织上注射AICAR，以探讨AMPK活性变化对骨骼肌蛋白质降解的研究。本研究拟采用大鼠一次性注射AMPK激活剂AICAR，提高骨骼肌中AMPK活性，观察大鼠腓肠肌中MuRFl、MAFbx基因表达量和3-MH含量的变化，探讨AMPK活性升高对骨骼肌蛋白质降解的作用，以及探讨MuRF1、MAFbx基因表达量和3-MH含量在反映骨骼肌蛋白质降解中的差异。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1.1　实验动物 　　8周龄健康雄性SD大鼠(SPF级，许可证号：SCXK(京)2007-0001，动物编号：0068277)，购于北京