BRAF基因与甲状腺癌分子诊疗研究进展.docVIP

BRAF基因与甲状腺癌分子诊疗研究进展 　　【摘要】 对甲状腺结节进行细针穿刺细胞学检查，给临床医生诊断甲状腺肿瘤提供了一个新的信息。该技术在甲状腺癌的临床诊断中，特别是BRAF基因的应用，在一定程度上提高了甲状腺癌诊疗水平。国内外最新研究表明，BRAF基因检测为甲状腺癌的诊断和预后提供了参考，并给临床上甲状腺癌的初始化治疗指明了一个方向。对于临床细针穿刺细胞学检测不能确定的甲状腺癌，BRAF分子检测技术可作为一个有用的检测手段，为临床诊断甲状腺癌提供一个决定性的参考，使更多的甲状腺癌患者得到个体化的治疗。本文就BRAF基因与甲状腺癌分子诊疗的关系进行综述。 　　【关键词】 BRAF； 细胞学； 分子诊断； 甲状腺癌 　　甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤，甲状腺癌来自滤泡或者滤泡旁细胞。滤泡源性肿瘤最普遍存在于甲状腺癌中，包括乳头状癌、卵泡癌和嗜酸性细胞癌。这些分化型甲状腺癌占所有甲状腺恶性肿瘤的95%[1]。过去几十年里整个西方世界甲状腺癌的发病率在增加。我国甲状腺癌的发病率由10/100万升到约30/100万～40/100万；而美国则增长了300%，乳头状癌大概占所有甲状腺癌的80%～90%[2]。临床上诊断甲状腺癌的方法非常多，如细针穿刺细胞学检查、PET/CT、DNA测序荧光原位杂交、PCR、逆转录PCR、实时PCR以及单链构象多态性分析PCR等，在一定程度上都能对甲状腺癌的诊断提供帮助，但在准确率上存在一定的假阴性。最近的研究表明，对甲状腺结节进行BRAF基因的检测对于排除或诊断甲状腺癌具有重要的临床意义。由此可见，BRAF基因的检测在甲状腺癌的临床诊断中扮演着至关重要的作用。以下就临床上对甲状腺癌诊断具有重要作用的检测方法进行阐述。 　　1 细针穿刺细胞学检查在甲状腺癌诊断中的局限性 　　1.1 细针穿刺细胞学检查的局限性 甲状腺结节为临床上常见的甲状腺疾病，但仅有5%的甲状腺结节发展为恶性肿瘤。术前通过对甲状腺结节进行细针穿刺细胞学检测是目前诊断甲状腺肿瘤的一个较好的诊断方法。是使用细针及针管，刺入病变区域内，通过提插等方式将病灶内的细胞或小组织块切割下来，同时借助针管内负压将其吸出，涂片及染色后在光镜下阅片，最后完成病理诊断的一种活检方法。其目的主要为诊断是否肿瘤、良恶性及类型，已成为肿瘤确诊的主要手段之一，尤其是近10年来影像技术的发展，在B超引导下，应用细针穿刺对浅表肿块，如乳腺、甲状腺、淋巴结等进行细胞学活检，是早期诊断肿瘤的最快捷、简便与安全的方法。研究表明，对穿刺出的组织样本进行分子生物学检测可明显提高该疾病细胞学诊断的准确度[3]，但其仍存在一定的局限性，主要包括以下几个方面：（1）不能从良性配对物中分辨卵泡状细胞癌还是嗜酸性细胞腺癌；（2）有造成恶性肿瘤转移和扩散的可能性；（3）穿刺为有创性的检查，可能会损伤血管或神经等；（4）穿刺不到位，有可能导致阴性结果的出现，从而延误疾病的诊疗时机。 　　1.2 贝塞斯达甲状腺细胞穿刺分级系统在甲状腺癌诊断中的作用 为了指出细胞穿刺的诊断局限性，这个分级系统提出了以下几种分类：不符合要求的、良性、恶性、不确定恶性肿瘤的、非典型和可疑性肿瘤的。这些分类最近已在一个学术机构被前瞻性的测试过[4]。学者们在一年内收集了3207例甲状腺结节，评估发现这些病例中不符合要求的有11.1%，良性73.8%，恶性5.2%，不确定恶性肿瘤的9.8%：其中包括5.5%滤泡性肿瘤/许莱特细胞肿瘤，3%非典型和1.3%可疑性肿瘤。378例患者接受了外科手术，有2.2%的假阳性率。贝塞斯达系统作为所有肿瘤的筛选方式，其特异性为68%，而作为恶性肿瘤的诊断方式其特异性为93%。还有一些学者发现，不确定恶性肿瘤中的恶性风险：非典组17%，滤泡性肿瘤25.4%，可疑性肿瘤组为70%[5]。这些结果说明，即使没有对穿刺出的组织进行细胞学检测，可疑性肿瘤组的恶性风险非常高，需要引起专科医生的重视[4-5]。关于分子诊断，国家癌症研究所的建议中明确规定：鉴于目前有限的证据，进一步的研究应适应临床使用的需要[6]。 　　2 分子检测技术在诊断甲状腺癌中的作用 　　能检测各种标本分子突变的生物技术在临床检测中被广泛应用，这些标本不仅限于血液、唾液试纸、新鲜的冰冻组织、细针穿刺组织，还包括福尔马林固定石蜡包埋的组织。当今临床实验室常见的分子分析技术包括DNA测序荧光原位杂交、PCR以及一些改良的分子检测技术，如逆转录PCR、实时PCR、单链构象多态性分析PCR。沈?诺?[7]对21例甲状腺癌患者应用亚甲蓝染色法行前哨淋巴结活检（sentinel lymph-node biopsy，SLNB），对SLN进行HE染色、细胞角蛋白19（CK19）的免疫组化染色（IHC）及RT-PCR检测，