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G6PD测定在新生儿黄疸中应用 　　【摘要】 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症是遗传性红细胞酶病中最常见的一种，呈全球性多民族分布。G6PD缺乏症主要由基因突变引起，为伴性不完全显性遗传，G6PD缺乏是新生儿发生早期病理性黄疸的危险因素。G6PD测定有助于早发现、采取有效的预防和治疗措施减少新生儿高疸红素血症及核黄疸，有利于新生儿健康成长。现对G6PD测定的方法、G6PD缺乏对新生儿黄疸的影响及预防治疗措施进行概述。 　　【关键词】 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶； 缺乏症； 新生儿黄疸； 应用 　　doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2015.35.052 　　黄疸是新生儿时期的常见疾病，新生儿早期黄疸不易发现，当间接胆红素异常增高可并发核黄疸或脑组织损害，严重威胁新生儿生命和健康，对提高我国人口素质极为不利。G6PD缺乏是高间接胆红素血症的病因之一，早期明确黄疸的病因并及时干预对新生儿健康成长意义重大。现将G6PD测定在新生儿黄疸中的应用综述如下。 　　1 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 　　葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）是一种存在于人体RBC内，参与葡萄糖磷酸戊糖旁路产生还原型辅酶Ⅱ（NADPH）的关键酶，对维护红细胞抗氧化系统的正常功能，保证红细胞膜骨架的稳定性有着极其重要的作用。G6PD缺乏症主要由基因突变引起，突变导致G6PD基因表达下降或G6PD酶结构改变，影响G6PD功能结构区的功能和二聚体的形成，致使G6PD酶活性降低。G6PD缺乏是伴性不完全显性遗传，其基因在X染色体长臂的2区8带上。按遗传规律：男性患儿及来源于母亲的女性患儿，母亲全部为G6PD缺乏的纯合子或杂合子，若女性患儿如为父源性，父亲为G6PD缺乏半合子。男性X染色体上的G6PD基因发生缺陷，酶活性就显著缺乏，故男性的酶活性只有两种状态：正常或显著缺乏；女性有两个X染色体，有两个G6PD基因，基因是否存在G6PD缺陷以及存在G6PD缺陷的红细胞数量的不同，使其酶活性受到不同程度的影响。故酶活性有三种状态：正常、中度缺乏和显著缺乏。男性发病率明显高于女性。 　　2 G6PD检测方法种类 　　G6PD检测方法很多，主要有以下方法。 　　2.1 高铁血红蛋白还原试验 红细胞中亚铁血红蛋白经亚硝酸盐作用变成高铁血红蛋白，正常红细胞的G6PD催化戊糖旁路使NADP变成NADPH，其脱出的氢经亚甲蓝试剂递氢作用使高铁血红蛋白还原成亚铁血红蛋白。当G6PD缺乏时，高铁血红蛋白还原率下降。该方法操作简便易行，实验稳定，成本低，检出率高，尤其是重度缺乏及正常人。该法无需特殊试剂，敏感度高，适用于基层进行筛查实验，但耗时长，假阳性高，特异性低。 　　2.2 荧光斑点试验 在G6PD和NADP+存在下，G6PD能使NADP+还原成NADPH，后者在紫外线照射下会发出荧光。荧光强弱反映酶活性强弱。对半合子和纯合子检出率最高，但对杂合子敏感性差，检出率不高。1995年谢彦晖等[1]经过改进，使特异性、敏感性和准确度都达到90%以上。该实验反应条件要求高，需专用仪器，因而在基层医院难于推广[2]。 　　2.3 硝基四氮唑蓝（NBT）比值法 即以NBT作为底物，间接测定G6PD活性和6PGD活性，计算G6PD/6PGD比值。受国际血液学标准化委员会推荐，本法操作简便、灵敏、结果比较可靠，对标本要求不严，试剂配制和设备简单。 　　2.4 NADPH定量比值法 血液中的G6PD催化G6P转化为6PG时，伴有NADP转化为NADPH，NADPH的量反映了G6PD的活性。通过直接测定NADPH的生成量来计算G6PD/6PGD比值。为世界卫生组织（WHO）推荐[3]，需要紫外分析仪或全自动生化分析仪，大大提高对女性杂合子的检出率，试剂用量少，出结果快。 　　2.5 G6PD活性检测 G6PD在NADP存在条件下催化葡萄糖-6-磷酸生成6-磷酸葡萄糖醛酸和NADPH。在340 nm处测定NADPH的生成速率，即可测定G6PD的活性。该方法省时、省力、简便、快捷，可减少试剂用量，降低检测成本，适用于大批量临床筛查，尤其适合于婚前、产前和新生儿筛查，是目前各个医院普遍使用的方法。G6PD活性的高低能反映其缺乏程度，但单测G6PD活性不能排除由其他原因引起的G6PD活性升高或降低，如：贫血、RBC增多症、溶血等。 　　2.6 G6PD基因检测 G6PD基因突变的检测最先用的是自然酶切点检测法。目前等位基因特异性扩增、等位基因寡核苷酸探针杂交等方法可检测已知突变；聚合酶链反应-单链构象多态性分析、变性梯度凝胶电泳等方法可检测未知突变。高分辨率熔解技术是近年来兴起的新检测方法，可同时检测出中国及东南亚主要的G1388A、G1376T、A95G基因突变。