L脯氨酸聚合物键合手性配体交换色谱固定相Ⅰ制备及应用.docVIP

L脯氨酸聚合物键合手性配体交换色谱固定相Ⅰ制备及应用 　　摘要：文章以自合成的5.0μm单分散亲水性交联聚甲基丙烯酸环氧丙酯-甲基丙烯酸乙二醇双酯（PGMA/EDMA）树脂[3]为载体，以L-脯氨酸为手性配体，制备了一种性能稳定，立体识别能力强的新型L-脯氨酸聚合物键合高效手性配体交换固定相。详细考察了各种色谱条件对手性化合物的保留行为及分离度的影响。制备的L-脯氨酸聚合物键合手性配体交换色谱固定相Ⅰ对15种衍生和非衍生的DL-氨基酸、α-羟基酸手性拆分和2种氨基醇类药物进行了直接光学拆分。且对DL-氨基酸的拆分具有较高的拆分因子，最好的分离因子α= 2.53。重要的是该固定相在较高pH的条件下，对两种氨基醇类药物进了直接光学拆分，而这种色谱条件是硅胶基质配体交换色谱固定相无法满足的。 　　关键词：L-脯氨酸；键合手性配体交换色谱固定相 　　中图分类号：O658 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2011）-12-0068-3 　　 　　氨基酸是组成蛋白质的基本元素，也是合成许多手性药物的前提，它的手性分离一直是一个重要课题。Davankov等[1,2]建立手性配体交换色谱法，将之应用于手性氨基酸异构体的拆分，该法在氨基酸及其衍生物对映体的分离方面具有其他手性色谱法所无法比拟的优势，因此在分离该类化合物中的应用最广泛。手性配体交换色谱固定相拆分机理是基于固定相手性配体、金属离子与被分离溶质对映体形成一对非对映的配合物，二者的热力学稳定性差异导致了色谱分离。 　　1 实验部分 　　1.1 仪器与试剂 　　高效液相色谱仪(岛津-LC20A)；CGY-100型高压气动泵；2003型电动搅拌器； HH-2数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；KQ-250B超声波清洗器(昆山市超生仪器有线公司)。单分散多孔交联PGMA/EDMA树脂按照文献方法合成[3](PGMA/EDMA树脂粒径为5.0μm，交联度为25%，平均孔径为400nm)；二氧六环(上海化学试剂公司，分析纯)；L-脯氨酸氨酸购自阿尔法埃沙公司(Alfa）；DL-DOPA购自Sigma ；DL-天冬酰胺(DL-Asn)、DL-缬氨酸(DL-Val)、DL-正缬氨酸(DL-norval)、DL-组氨酸(DL-His)均购自上海楷阳生物科技有限公司；DL-丝氨酸(DL-Ser)、DL-苏氨酸(DL-Thr)、DL-谷氨酸(DL-Glu)、DL-脯氨酸(DL-Pro)、DL-丙氨酸(DL-Alanine)、DL-天冬氨酸(DL-Asp)、DL-精氨酸(DL-Arg)、DL-赖氨酸(DL-Lys)、DL-蛋氨酸(DL-Met)、DL-异亮氨酸(DL-Ile)、DL-苯丙氨酸(DL-Phe)、PTH-DL-谷氨酸(PTH-D,L-Glutamic acid)、 PTH-DL-天冬氨酸(PTH-D,L- Aspartic acid)由王俊德教授(中国科学院大连化学物理研究所)赠送。麻黄碱((-)-ephedrine)和伪麻黄碱((+)-pseudophedrine)由刘利军教授(宁夏大学化学化工学院)赠送。 　　1.2 色谱柱的填充及色谱条件 　　色谱柱：150mm×4.6 mm I.D.；装柱压力：25 MPa；匀浆液：1，4-二氧六环-四氯化碳（V(1，4-二氧六环):V(四氯化碳)=2：1）；顶替液：乙醇。 　　色谱条件：流动相为1.0.2mol/LNaAc+0.1mmol/LCu(Ac)2水溶液，pH 4.6-5.6；2. 0.2mol/LNaAc+0.1 mmol/LCu(Ac)2+10 mmol/L TEA, pH 12；检测波长：254 nm；样品用流动相溶解；对映体的出峰顺序通过注入相应的L-氨基酸的保留时间确定。容量因子k=(tR-t0)/t0，其中tR是样品的保留时间，t0是用溶剂(甲酸)标记的死时间；手性分离因子α = k2/k1 ，其中k1是先洗脱对映体的容量因子； 　　1.3 色谱固定相的制备 　　1.3.1 L-脯氨酸与单分散PGMA/EDMA微球反应 在三颈瓶中加入3.0 g 单分散PGMA/EDMA树脂，20mL二氧六环，3.0gL-羟脯氨酸 (用23 mL1 mol/LNa2CO3水溶液溶解)，于50℃恒温水浴反应24小时。反应产物依次用水和丙酮洗涤，真空干燥。 　　1.3.2 L-脯氨酸手性键合固定相与Cu2+络合 在三颈瓶中加入3.0 g上步反应的产物，0.1 mol/L Cu(Ac)2浸泡1小时后于室温下搅拌络合48小时，产物用蒸馏水洗至无Cu离子检出。再依次用乙醇和丙酮洗涤，真空干燥。总的反应式如图1所示： 　　 　　2.3 DL-氨基酸在手性配体交换色谱固定相的色谱评价 　　2.3.1 流速对拆分