DAPT对骨肉瘤U2OS细胞增殖和凋亡影响实验研究.docVIP

DAPT对骨肉瘤U2OS细胞增殖和凋亡影响实验研究 　　[摘要] 目的 观察γ-分泌酶抑制剂DAPT对人骨肉瘤细胞系U2OS增殖和凋亡的影响，探讨DAPT抑制骨肉瘤增殖并诱导其凋亡的可能机制。 方法 采用体外培养人成骨肉瘤细胞系U2OS，CCK-8法检测不同浓度DAPT对成骨肉瘤细胞系U2OS生长的抑制作用；Annexin V-FITC/PI双标染色，流式细胞仪检测细胞凋亡率；Hoechst 33258染色，倒置荧光显微镜下观察细胞凋亡的形态学变化；应用RT-PCR和Western blot法检测DAPT对凋亡通路相关mRNA和蛋白表达的影响；采用Caspase活性检测试剂盒检测Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9的活性变化。 结果 CCK-8检测显示5～50 μmol/L的DAPT可抑制人骨肉瘤U2OS细胞增殖并具有时间和剂量依赖性；流式细胞术检测显示5、10、20 μmol/L的DAPT可明显诱导骨肉瘤U2OS细胞发生凋亡，与对照组相比差异有统计学意义（P 0.05）；5、10、20 μmol/L的DAPT处理后，Hoechst 33258染色可见凋亡小体；RT-PCR和Western blot分析显示，经DAPT（5、10、30 μmol/L）处理后的骨肉瘤细胞系U2OS表达Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9 mRNA较对照