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显微镜油镜的使用和原核微生物形态与结构的观察 一、实验目的 1．掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养 2．观察细菌的个体形态，学会生物图的绘制。 二、显微镜的结构、光学原理及其操作方法 (一)显微镜的结构 1．显微镜各部件构成及名称(实验图-1) 实验图-1 2．开关和控制旋钮（实验图-2） 实验图-2 （二）光学系统及其光学原理 (1)?? 目镜：目镜用螺钉固定在目镜筒上 (2)?? 物镜：物镜装在转换器的孔上，物镜有多种放大倍数 物镜有低倍(8×、10×、20×三种)、高倍(40×或45×)及油镜(100×)。物镜的性能由数值孔径(Numerical Aperture ,N.A.)决定,数值孔径=n.sinα/2,其意为玻片和物镜之间的折射率乘上光线投射到物镜上的最大夹角的一半的正弦。光线投射到物镜的角度越大,显微镜的效能越大,该角度的大小决定于物镜的直径和焦距。n是影响数值孔径的因素,空气的折射率n=1,水的折射率n=1.33,香柏油的折射率n=1.52,用油镜时光线a/2为60o,则sin60=0.87。从实验图-3可知: 实验图-3 以空气为介质时：N.A.=1×0.87=0.87 以水为介质时：N.A.=1.33×0.87=1.16 以香柏油为介质时：N.A.=1.52×0.87=1.32 显微镜的性能还依赖于物镜的分辨率,分辨率即能分辨两点之间的最小距离的能力。分辨率用δ表示,δ=0.61×λ/N.A(λ为波长),分辨率与数值孔径成正比,与波长成反比。增大数值孔径,缩短波长可提高显微镜的分辨率,使目的物的细微结构更清晰可见。事实上可见光的波长(0.38～0.7μm)是不可能缩短的,只有靠增大数值孔径来提高分辨率。 物镜上标有:N.A.1.25、100×、“0I、160/0.17、0.16等字样,其中N.A.1.25为数值孔径，100×为放大倍数，160/0.17中160表示镜筒长，0.17表示要求盖玻片的厚度。OI表示油镜，(即Oil Immersion)，0.16为工作距离。 显微镜的总放大倍数为物镜放大倍数和目镜放大倍数的乘积。 (3)?? 聚光器：聚光器安装在载物台的下面，反光镜反射来的光线通过聚光器被聚集成光锥照射到标本上，可增强照明度，提高物镜的分辨率。聚光器可上、下调节，它中间装有光圈可调节光亮度，在看高倍镜和油镜时需调节聚光器，合理调节聚光器的高度和光圈的大小，可得到适当的光照和清晰的图像。 (4)?? 滤光片：自然光由各种波长的光组成，如只需某一波长的光线，可选用合适的滤光片，以提高分辨率，增加反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等颜色。根据标本颜色，在聚光器下加相应的滤光片。 （三）显微镜操作注意事项 ??1． 搬运显微镜（实验图-4） 显微镜是精密仪器,因此搬运时要小心。猛烈冲撞和野蛮操作都会造成仪器损坏。震动物镜,会降低成像的精确度。 ·搬运显微镜时,用双手握住显微镜弯臂。 ·不要抓住调焦于轮、目镜筒或载物台。这些部件容易脱开或移位，可能导致故障。 ? ? ? ? 2．调焦手轮（实验图-5） 当载物台已经到达移动的极限位置之后，请不要继续旋转粗调焦手轮。这些操作都会导致聚焦机构的损坏。 ? 3． 浸油观察 只需使用少量的浸油。如果浸油太多，多余的油就会流到载物台和聚光器上，导致性能降低。 ? (四)显微镜的操作方法1．置显微镜于固定的桌上，插上电源，打开主机电源开关 2．调节瞳距，使左右眼视场重叠合一（实验图-6） 实验图-6? 视场 3．低倍镜对焦 (1)?? 转动目镜屈光度调节环，调节环底边与刻度线对齐 (2)?? 取一块切片放置在载物台上，使其盖玻片朝上，使观察的目的物置于圆孔的正中央。 (3)?? 将10×物镜移入光路，用调焦手轮调焦。将粗调节器向下旋转(或载物台向上旋转)，眼睛注视物镜，以防物镜和载玻片相碰。当物镜的尖端距载玻片约0.5cm处时停止旋转。 (4)?? 左眼向目镜里观察，将粗调节器向上旋转，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细调节器调节，至目的物清晰为止。 (5)?? 如果粗调节器旋得太快，使超过焦点，必须从第(3)步重调，不应正视目镜情况下调粗调节器，以防没把握的旋转使物镜与载玻片相碰撞坏。 (6)?? ?观察时两眼同时睁开(双眼不感疲劳)。单筒显微镜应习惯用左眼观察，以便于绘图。 4.高倍镜的操作 (1)?? 使用高倍镜前，先用低倍镜观察，发现目的物后将它移至视野正中处。 (2)?? ?旋动转换器换高倍镜，如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动，说明原来低倍镜就没有调准焦距，目的物并没有找到，要用低倍镜重调。如果调对了，换高倍镜时基本可以看到目的物。若有点模糊，用细调节器调就清晰可见。 5.油镜的操作? ? ? ?(1)如果用高倍镜目