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LSD1抑制剂研究进展 　　摘要：组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1（LSD1）是一种黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD）依赖的去甲基化酶，能够去除H3K4和H3K9的单、双甲基。研究发现LSD1在众多肿瘤中高表达，与癌症密切相关。本文对LSD1的结构、催化反应机理，以及近几年LSD1抑制剂的研究进展作一综述。 　　关键词：组蛋白；LSD1；抑制剂；进展 　　2004年，哈佛医学院施扬课题组发现了第一个组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1（Lysine Specific Demethylase 1，LSD1）。该课题组首次确认组蛋白甲基化是一个动态平衡过程。这一发现对组蛋白修饰的作用机制及其相应的药物研究提供了全新思路。LSD1是一种黄素腺嘌呤二核苷酸依赖的去甲基化酶，能够去除H3K4和H3K9的单、双甲基，从而调节组蛋白和其他蛋白的相互作用，并影响基因转录的激活、抑制和染色体失活等过程。 　　1 LSD1的结构 　　LSD1含有852个氨基酸，晶体结构显示LSD1主要由三部分组成：N端的SWIRM (Swi3p/Rsc8p/Moira)结构域，C端的胺基氧化酶(AOL)结构域，该区域分为FAD结合结构域和底物结合结构域，两者组成催化活性中心，以及中心定位的Tower结构域。Tower结构域具有两条反向平衡的α螺旋，对LSD1的活性起重要的作用[1]。LSD1是胺基氧化酶的同源蛋白，与多胺氧化酶（PAO）的相似度为22.4%，与单胺氧化酶A和B（MAO-A, MAO-B）的相似度为17.6%。 　　2催化反应机理 　　LSD1催化氧化反应时，要求胺基底物上必须有一个质子，因此其只能催化含有单甲基和双甲基的赖氨酸底物。LSD1与底物反应时，FAD从甲基化的组蛋白赖氨酸中得到质子，生成FADH2，甲基化的赖氨酸失去质子生成亚胺中间体，FADH2被氧化生成FAD和H2O2，亚胺中间体加水后生成胺基和甲醛[2]。 　　LSD1主要通过以下3个途径来调节基因的表达:①通过CoREST的SANT2结构域与靶基因结合，引起H3K4去甲基化，从而导致转录抑制；②LSD1与雌激素/雄激素受体结合后，能使H3K9去甲基化，引起激素受体依赖的基因转录激活；③LSD1通过对H3K4的去甲基化，使得DNA甲基转移酶(DNMTs)的正调控因子DNMT3L能够与未甲基化的K4位点结合，促进DNMTs的表达，引起DNA重新甲基化，从而导致基因转录抑制[3]。 　　3 LSD1抑制剂 　　LSD1能在多种肿瘤中高表达，是比较理想的抗肿瘤药物靶点。近年来的研究也证实LSD1抑制剂对多种肿瘤模型有效，并表现出对肿瘤细胞的高选择性。目前有一些LSD1抑制剂已经进入临床研究阶段。以下对近几年发现报道的LSD1抑制剂进行归纳总结。 　　3.1苯基环丙胺LSD1抑制剂LSD1与单胺氧化酶是同源蛋白，因此MAO抑制剂被用来研究对LSD1的作用。Schule等发现MAO抑制剂苯基环丙胺①对LSD1有比较弱的抑制作用。此外，MAO抑制剂优降宁；②也能够抑制LSD1的活性,但抑制率低、选择性差。机制研究发现，其结构中的苯基环丙胺通过和FAD共价结合抑制了LSD1的活性，机理如图1所示[4]。此后，以苯基环丙胺为母核的大量衍生物陆续开发出来,是当前研究最多的一类LSD1抑制剂[5]。此类抑制剂由于和FAD产生共价结合，因此不能排除对其他含有FAD的酶的潜在作用可能性。 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　图1苯基环丙胺抑制剂机制 　　Mimasu等设计合成的苯基环丙胺类LSD1抑制剂3（IC50=0.99μM）可提高HEK293T细胞中H3K4二甲基化的水平[6]。西班牙Oryzon Genomics公司开发了大量苯基环丙胺类LSD1抑制剂，如4-6，其IC50分别为5nM、29～43nM和14nM。另有多个化合物处于临床前或临床研究阶段，其中ORY-1001于2013年8月获得EMA批准，作为治疗急性髓细胞白血病（AML）的孤儿药进行临床实验，目前已处于IIa临床研究阶段。GSK 2879552是最近报道的选择性不可逆LSD1抑制剂，在美国处于I期临床研究，用于治疗复发性和难治性小细胞肺癌[7]，见图2。 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　 　　图2 苯基环丙胺LSD1抑制剂 　　3.2多胺类LSD1抑制剂自2007年起，Huang课题组发现多胺类LSD1抑制剂7-10能够明显抑制结肠癌细胞系HCT-116的活性，提高H3K4的单甲基化和二甲基化水平，并能诱导SFRP1、SFRP2、SFRP5和转录因子GATA5的重新表达。将9单用于接种了HCT-116的裸鼠，能够显著抑制肿瘤生长。