酶工程 第四篇 酶分子修饰.pdf

Chapter 4 Modification of Chapter 4 Modification of CChhaapptteerr 44 MMooddiiffiiccaattiioonn ooff Enzyme Molecule Enzyme Molecule EEnnzzyymmee MMoolleeccuullee 酶的分子修饰 Contents of chapter 4 Go 1、什么是酶分子修饰 Go 2、酶分子修饰的基本要求和条件 Go 3、酶分子的修饰方法 Go 4、酶修饰后的性质变化 Go 5、酶的定向进化 4.1 什么是酶分子修饰？ � 通过各种方法使酶分子的结构发生某些改变，从而改变 酶的某些特性和功能的技术过程称为酶分子修饰。即： 在体外将酶分子通过人工的方法与一些化学基团（物 质），特别是具有生物相容性的物质，进行共价连接， 从而改变酶的结构和性质。 酶分子修饰的意义 � 提高酶的活力 activity � 增强酶的稳定性 stability � 降低或消除酶的抗原性 immunological property � 研究和了解酶分子中主链、侧链、组成单位、金属离子 和各种物理因素对酶分子空间构象的影响 structure 回本章目录 4.2 酶分子修饰的基本要求和条件 � 对酶分子进行修饰必须在修饰原理、修饰剂和反应条件的 选择以及酶学性质等方面都要有足够的了解。 � （1）酶的稳定性 � 热稳定性、酸碱稳定性、作用温度、pH、抑制剂等。 � （2）酶活性中心的状况 � 活性中心基团、辅因子等。其他如分子大小、性状、 亚基数等。 酶分子修饰的条件 � 修饰反应尽可能在酶稳定条件下进行，并尽量不破坏酶 活性功能的必需基团，使修饰率高，同时酶的活力回收 高。 � （1）pH与离子强度 � pH决定了酶蛋白分子中反应基团的解离状态。由 于它们的解离状态不同，反应性能也不同。 � （2）修饰反应的温度与时间 � 严格控制温度和时间可以减少以至消除一些非专 一性的修饰反应。 � （3）反应体系中酶与修饰剂的比例 回本章目录 4.3 酶分子的修饰方法 � 金属离子置换修饰, � 大分子结合修饰(共价/非共价) � 侧链基团修饰 � 肽链有限水解修饰 � 氨基酸置换修饰 � 酶分子的物理修饰 (1) 酶的金属离子置换修饰 � 把酶分子中的金属离子换成另一种金属离子，使酶的特性和功能 发生改变的修饰方法称为金属离子置换修饰。 2+ 2+ � α-淀粉酶中的钙离子（Ca ），谷氨酸脱氢酶中的锌离子(Zn )， 2+ 过氧化氢酶分子中的铁离子(Fe )，酰基氨基酸酶分子中的锌离子 2+ 2+ 2+ （Zn ）,超氧化物歧化酶分子中的铜、锌离子(Cu ,Zn ) � 若从酶分子中除去其所含的金属离子，酶往往会丧失其催化活性。 如果重新加入原有的金属离子，酶的催化活性可以恢复或者部分 恢复。若用另一种金属离子进行置换，则可使酶呈现出不同的特 性。有的可以使酶的活性降低甚至丧失，有的却可以使酶的活力 提高或者增加酶的稳定性。 金属离子置换修饰的过程 � a. 酶的分离纯化：首先将欲进行修饰的酶经过分离纯化，除去杂质，获 得具有一定纯度的酶液。 � b. 除去原有的金属离子：在经过纯化的酶液中加入一定量的金属螯合