PDGF―B与TGF―aEGF和8―Br―cAMP共培养对PCOS患者颗粒细胞生成雌激素影响.docVIP

PDGF―B与TGF―aEGF和8―Br―cAMP共培养对PCOS患者颗粒细胞生成雌激素影响 　　【摘 要】目的：通过血小板衍生生长因子（PDGF-B）、表皮生长因子（EGF）、转化生长因子-a（TGF-a）和8-Br-cAMP共培养对多囊卵巢综合征（PCOS）患者离体卵巢黄素化颗粒细胞雌二醇（E2）生成的影响，探讨PDGF-B在多囊卵巢形成中的作用。方法：收集体外受精-胚胎移植（IVF-ET）时PC0S患者的卵巢黄素化颗粒细胞进行体外原代培养，在培养0、48、120 h时以睾酮（10-7mol/L）作为底物，分别添加剂量相同的（10?g/L）PDGF-B和TGF-a（A组）；PDGF-B和8-Br-cAMP （B组）；PDGF-B和EGF（C组）；PDGF-B、TGF-a和EGF（D组）；PDGF-B、EGF、TGF-a和8-Br-cAMP （E组）于无血清培养液中，培养3 h，收集培养上清，用放射免疫法测定E2含量。以不加任何细胞因子为空白对照。结果：与空白对照比较，PCOS患者颗粒细胞经四种因子共同培养，A组在Oh和120h E2分泌量显著增加（P 0.05）；B组在48h和120h E2分泌量显著增加（P 0.05）；C组在0h和120h显著增加E2分泌量（P 0.05）；D组在120h显著增加E2分泌量（P 0.05）；E组在48h和120h E2分泌量显著增加（P 0.05）。结论：PDGF-B、TGF-a、EGF和8-Br-cAMP共同作用，增加PCOS患者颗粒细胞E2的分泌，PDGF-B可能与多囊卵巢的形成有关。 　　【关键词】多囊卵巢综合征；血小板衍生生长因子；表皮生长因子；转化生长因子-a；8-Br-cAMP；颗粒细胞；多囊卵巢 　　【中图分类号】R711.75 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）02-0160-02 　　随着生活环境的污染和工作压力的增加，多囊卵巢综合征（Polycystic Ovarian Syndmme，PCOS）的发病率逐年递增，占育龄妇女的6-8 %[1]，以持续不排卵和雄激素增高为主要特征。血小板衍生生长因子（Platelet Derived Growth Factor-B，PDGF-B）、转化生长因子-a（Transformation Growth Factor-a，TGF-a）、表皮生长因子（Epidermal Growth Factor，EGF）和8-Br-cAMP在PCOS发病机制中占有非常重要的地位[2-4]。本研究将PDGF-B、TGF-a、EGF和8-Br-cAMP分别与PCOS患者离体颗粒细胞共培养，观察不同时间对雌激素（E2）分泌的影响，探讨PDGF-B与TGF-a、EGF和8-Br-cAMP在PCOS患者多囊卵巢发病机制中的作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 研究对象 选择2004年3月至2005年3月在郑州大学第三附属医院生殖医学中心行体外受精-胚胎移植（IVF-ET）的PCOS患者6例。均符合人民卫生出版社《妇产科学》第6版PCOS的诊断标准。超促排卵方案均采用长方案即促性腺激素释放激素激动剂（GnRH-a）加高纯促性腺激素（rFSH）。未用其他激素类药物，排除子宫内膜异位症以及其他内分泌疾病。年龄26.0-31.0 （28.1±2.3）岁，体质指数（BMI）19.0―23.5（21.2±2.4）kg/m2。 　　1.2 颗粒细胞的分离和培养 6例患者进行长方案超促排卵，当主导卵泡≥18mm时，注射人绒毛膜促性腺激素（hCG，丽珠制药厂） 后36 h，在B超引导下经阴道取卵时留取卵泡液，卵泡液缓慢叠加在淋巴细胞分离液上（卵泡液与淋巴细胞分离液体积比为1：1），2000 r/min离心10min，取中间层颗粒细胞，用3～5mL TCMl99培养基混匀，2000 r/min离心l0min，弃上清，沉淀加入含体积分数10%小牛血清TCM 199lmL，用巴斯德管反复吹打10 min。台盼蓝染色后用细胞计数器行颗粒细胞计数（90%以上为活细胞），以40～80?L-1接种于48孔培养板中，每孔250?L，置37℃、体积分数5%CO2培养箱中培养，每48 h更换培养液。培养48、120 h，倒置显微镜下观察细胞形态。 　　1.3 PDGF-B、TGF-a、EGF和8-Br-cAMP对人颗粒细胞E2合成的影响 以10?L睾酮（10-7 mol/L）作为底物，分5组培养。每组分别添加等同剂量的（10?g/L）细胞因子，A组为 PDGF-BB（Sigma， USA）和TGF-a（Sigma， USA）；B组添加PDGF-B和8-Br-cAMP（Sigma， USA）；PDGF-B和EGF（C组）；PDGF-B、EGF和TGF-