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RECK在大肠癌中表达及临床意义 　　【摘要】目的 研究RECK在大肠癌及正常大肠组织中的表达，探讨其与大肠癌转移与预后的关系。方法 应用免疫组织化学法（SABC）检测50例大肠癌组织和20例正常大肠黏膜组织中RECK的表达。结果 RECK在大肠癌组织中的阳性表达率为64%，明显低于在正常大肠黏膜组织中的表达(100%) (P0.05)，并随肿瘤病理分化程度的降低、临床Dukes分期的提高、淋巴转移的产生而降低(P0.05)。结论 大肠癌组织中RECK低表达，RECK可能在大肠癌的转移过程中起重要作用。 　　【关键词】大肠癌；RECK 　　大肠癌是人类主要的恶性肿瘤之一, 居恶性肿瘤发病率第三位。侵袭和转移是影响大肠癌患者疗效和预后的重要因素。RECK基因是1998年发现的一种抑癌基因，研究表明其通过抑制MMPs与肿瘤血管生成阻断肿瘤侵袭和转移。本研究应用免疫组织化学法（SABC）检测50例大肠癌组织和20例正常大肠黏膜组织中RECK的表达，并通过分析大肠癌组织中RECK的表达与临床病理因素的关系，以期寻找大肠癌判断预后的分子指标。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器和试剂浓缩型RECK兔抗人mAb购于美国Santa Cruz Biotechnology公司。SABC免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物科技有限公司。 　　1.2 组织标本采集及处理收集武汉市第八医院2007年8月~2008年3月手术切除的大肠癌组织标本50例，以癌组织中心组织为癌症组，随机抽取20例，取距癌中心组织10cm处正常组织为正常对照组。50例大肠癌患者中男24例（年龄33~88岁，平均56.58岁），女26例（年龄35~80岁，平均61.96岁）。所有病例均无糖尿病、糖耐量异常病史，术前均未作放疗和化疗。并按国际癌症协会所定的标准行分化程度分级和Dukes分期，所有癌组织均经病理检验确诊，所有作为正常对照组织的断端组织均未发现癌细胞。标本均经过4%中性甲醛溶液固定后常规石蜡包埋，4 μm连续切片备用。 　　1.3 方法免疫组织化学SABC法检测RECK的表达, 用已知的RECK阳性的正常大肠组织切片作为阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。切片经脱蜡处理后，3% H2O220 min阻断内源性过氧化物酶, 正常山羊血清室温封闭30 min后,按步骤分别滴加一抗RECK(1:100)、MMP-2(1:75)和生物素化的二抗(1:100)及SABC试剂，DAB染色，然后常规复染、脱水、透明、封片后镜下观察。 　　1.4 染色结果判断用Olympus显微镜及显微摄像仪对染色组织切片进行观察、照相。先在低倍镜(40×)下观察表达情况，RECK蛋白阳性信号均呈棕黄色颗粒样物质。转高倍镜下随机选取5个视野（每个视野观察细胞数不少于200个)，按阳性细胞所占百分比及着色深浅进行结果判定。按切片中细胞着色深浅评分：0分，细胞无显色；1分，浅黄色；2分，棕黄色；3分，棕褐色；按阳性细胞数占同类细胞数的百分比，70％为3分。取，两项评分的乘积作为总积分，0~2分为阴性(-)，3~4分为阳性(+)，≥4分为强阳性(++)。 　　1.5 统计分析应用SPSS 16.0统计软件进行统计学处理，各组间阳性表达率用χ2检验。 　　2 结果 　　2.1 RECK的表达和分布RECK在正常大肠黏膜组织中的阳性表达率为100%(20/20)，主要分布在正常结肠黏膜腺体细胞的细胞质和细胞膜。RECK在大肠癌组织中的阳性表达率为64%(32/50)，明显低于在正常大肠黏膜组织中的表达(P0.05)。（见表1）。 　　2.2 RECK在大肠癌中的表达与临床病理因素的关系RECK蛋白阳性表达率与大肠癌患者的性别、年龄无关(P0.05)，并随肿瘤病理分化程度的降低、临床分期的提高及淋巴转移的产生逐渐降低(P0.05)。（见表2）。 　　表1 RECK在大肠癌组织及正常大肠组织中的表达 　　Tab 1 RECKprotein expression in colorectal cancer tissues and normal colorectal mucosa tissues 　　 　　例数 RECK 　　χ2 　　P 　　 阴性阳性阳性率(%) 　　大肠癌组 　　正常大肠组 50 　　20 18 3264% 　　0 20 100% 9.692 0.002 　　 　　表2RECK的表达与临床病理因素的关系 　　Tab 2 Correlation between the levels of RECK expression and clinic pathological factors 　　 　　例数 RECK 　　 χ2 　　P