SIRT1p53Ki―67在结直肠癌中表达及意义.docVIP

SIRT1p53Ki―67在结直肠癌中表达及意义 　　【摘 要】目的：研究SIRT1在结直肠癌中的表达情况，分析它与临床病理学特征及相关基因表达水平的关系，以期探讨结直肠癌发生和发展的机制。方法：应用免疫组化Envision两步法检测60例结直肠癌组织和30例正常结直肠黏膜组织中SIRT1的表达情况，分析SIRT1的临床病理学意义，以及与p53、Ki-67之间的相互关系。结果：60例结直肠癌中，SIRT1在结直肠癌中的阳性表达率高于正常结直肠黏膜（P0.05）。SIRT1表达与结直肠癌浸润深度（P=0.021）、淋巴结转移（P=0.020）、pTNM分期（P=0.003）、p53的表达（P=0.024）、Ki-67的表达（P=0.021）均呈正相关，SIRT1在有淋巴结转移组中的阳性表达率高于无淋巴结转移组，差异具有统计学意义（P0.05）。结论：SIRT1在结直肠癌组织中呈高表达，且与肿瘤浸润深度、淋巴结转移、临床分期有关，SIRT1的表达与p53、Ki-67的表达呈正相关，提示SIRT1可能参与结直肠癌的发生发展，并可能成为判定结直肠癌恶性程度及评估手术治疗患者预后的生物学指标，联合检测SIRT1、p53和Ki-67的表达对评估结直肠癌患者的病情提供一定的理论依据，并可作为有效的治疗靶点。 　　【关键词】SIRT1；结直肠肿瘤；p53；Ki-67 　　【中图分类号】R735.5 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）04-2069-02 　　结直肠癌（colorectal cancer， CRC）是最常见的恶性肿瘤之一，在全球恶性肿瘤中的发病率已位居第3位[1]，侵袭和转移仍然是其不良预后的主要原因，其转移的潜在性通常难以预测，尚缺乏有效的早期诊断手段，严重危害人民的健康。沉默信息调节因子1（sirtuin type 1，SIRT1）是目前肿瘤学研究的热点基因之一，是依赖于NAD+的Ⅲ类组蛋白脱乙酰酶，是Sir2的哺乳动物同源物，在体内通过去乙酰化修饰作用，调节基因表达，参与细胞增殖、分化、凋亡等多种细胞生物学过程。近年研究发现，SIRT1蛋白在多种实体瘤中高表达，它可通过凋亡相关因子p53[2]途径调节多种生理学底物，如HIC1、FOXO、DBC1等的转录、翻译，还可以通过调节基质金属蛋白酶2[3]（Matrix metalloproteinase-2）、C-MYC[4]等、沉默抑癌基因[5]、促进多药耐药基因（MDR1）的表达[6]影响细胞寿命，进而参与肿瘤的发生发展与耐药以及肿瘤细胞的浸润转移。本研究应用免疫组化染色方法，检测SIRT1在结直肠癌及癌旁正常组织中的表达，分析其与临床病理参数的关系，探讨SIRT1在结直肠癌发生发展中的作用。 　　1 资料与方法 　　1.1 研究对象：收集2007年3月至2012年4月在保定市第一中心医院行手术切除的结直肠癌存档蜡块60例为实验组及结直肠镜活检证实为正常的结直肠黏膜30例为对照组，所有CRC患者诊断明确，术前均未行任何放化疗及内分泌治疗，均经外科手术切除后送检病理检查，证实为原发性CRC，且为首发，均未合并心脏病、脑血管疾病及其他系统疾病，病理资料完整。两组病例的性别、年龄之间比较差异均无统计学意义。实验组男性33例，女性27例；结肠35例，直肠25例；年龄23-77岁，平均年龄54.7±11.6岁；所有病例资料完整，包括血清CEA值。全部标本术后立即取材，经10%中性福尔马林液固定，常规处理后石蜡包埋。 　　1.2 免疫组化：采用Envision两步法。将石蜡切片中仍能见到癌组织的石蜡切片做SIRT1指标的免疫组织化学检测，通过对病例资料进行查漏登记，发现有些病例免疫组化结果中无p53、Ki-67，将相应病例的组织蜡块挑出，与SIRT1同时行免疫组化检测。所用试剂：兔抗人SIRT1单克隆抗体（克隆号[E104]ab32441）购于美国Abcam公司，工作浓度均为1：100；p53、Ki-67为即用型单克隆抗体，二抗为快捷型酶标羊抗鼠/兔IgG聚合物，均购自福州迈新公司，免疫组化检测试剂盒、浓缩型DAB试剂盒购自北京中衫金桥生物技术有限公司。参照试剂盒说明操作，以PBS代替一抗做阴性对照，已知阳性切片做阳性对照，光镜下观察染色结果，所有切片染色结果均由两名资深病理医师复审，以提高结果的可靠性。 　　1.3 结果判定：SIRT1蛋白主要定位于细胞核中，P53蛋白定位于细胞核，无背景着色情况下以胞核出现黄色或棕色颗粒者为阳性染色；每例均随机观察10个高倍视野，用半定量积分法判断结果：①黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；②计数10个高倍视野，阳性细胞在同类细胞中所占百分率75%为3分；③按上述两项指标的分数乘积高低分为：0分为阴性（