不同搅拌转速和通气量对桑黄深层发酵培养影响.docVIP

不同搅拌转速和通气量对桑黄深层发酵培养的影响 　　探讨在20 L搅拌式发酵罐中，转速和通气量对桑黄菌丝生物量、胞外多糖产率、溶氧以及菌丝形态的影响。结果表明，实验范围内，转速为150 r/min时，桑黄菌丝体生物量最大（12.65 g/L），胞外多糖得率最高（2.99 g/L），相对溶氧下降最快，菌球小球状、较紧密、丝状体比例小；通气量为1∶0.65 vvm，桑黄菌丝体生物量最大（12.69 g/L），胞外多糖得率最高（3.00 g/L），相对溶氧下降最快，菌球大小均匀、紧密、生长良好。 　　桑黄； 深层发酵； 搅拌转速； 通气量 　　桑黄属担子菌亚门（Basidiomycotina），层菌纲（Hymenomycetes），非褶菌目（Aphyllophorales），锈革孔菌科（Hymenochaeyaceae），针层孔菌属（Phellinus）[1]，属内又分为火木层孔菌（P. igniarius），鲍氏针层孔菌（P. baumii）和裂蹄针层孔菌（P. linteus）[2]，是近几年开发的一种多年生的珍贵药用真菌，有“森林黄金”之美称。据《中药大辞典》记载，其可治血崩、血淋、带下、闭经等妇科疾病[3]。现代研究发现其抗癌、抗菌、抗纤维化、抗氧化等效果显著，广泛应用于医药、食品、日用化工、保健品等行业。 　　桑黄中具有抗肿瘤作用的主要活性物质是桑黄多糖[4]。桑黄多糖不但含有β1，3和1，6D葡萄糖，还有半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖和墨角藻糖等，比其它担子菌（包括云芝、灵芝）的多糖成分复杂[5]。桑黄多糖能通过细胞调节和体液调节提高免疫力，从而抑制肿瘤细胞的生长转移，并且无毒副作用[6]。桑黄多糖能激活巨噬细胞、增强其吞噬功能、诱导巨噬细胞产生和分泌肿瘤坏死因子[7]，是国际公认的生物治癌药剂中有效率最高的一种药用真菌[8] 。 　　近年来，桑黄深层发酵培养得到的菌丝体和多糖受到了广泛关注，由于它所具有的各种生理活性物质，目前更多的研究集中在其药理方面[912]。此外很多研究集中在摇瓶发酵的影响因素，如培养基优化、培养条件的选择等方面[1316]。但是其深层发酵的扩大培养目前还很少报道。笔者前期优化了培养基和培养条件[17]，本次试验在发酵罐中研究不同转速和通气量对桑黄发酵的影响，以期得出较佳操作条件，为桑黄的工业化放大生产提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1供试菌株 　　供试菌株桑黄菌种来自于陕西省微生物研究所微生物资源中心第三研究室，经分子鉴定为鲍氏针层孔菌（P. baumii）[18]。 　　1.2培养基 　　母种培养基：200 g马铃薯，20 g葡萄糖，5 g蛋白胨， 1.0 g KH2PO4， 0.5 g MgSO4，10 mg维生素B1 ，20 g琼脂，1000 mL水，pH自然。 　　种子培养基： 20 g葡萄糖，4 g蛋白胨，1.0 g KH2PO4，0.5 g MgSO4，10 mg维生素B1 ，1000 mL水，pH 6.5。 　　发酵培养基：10 g玉米粉，10 g麸皮，20 g葡萄糖，5 g蛋白胨，5 g酵母膏，1.0 g KH2PO4，0.5 g MgSO4，10 mg维生素B1 ，1000 mL水，pH自然。 　　1.3种子液制备 　　将0.5 cm2活化后的桑黄斜面菌种接入100 mL种子培养基（300 mL三角瓶），150 r/min、28 ℃培养 5 d，收集种子液。 　　1.4不同搅拌转速对桑黄生长的影响 　　在20 L发酵罐中装液60%（v/v），接种量10%（v/v），通气量1∶0.5 vvm，在28 ℃条件下分别调节搅拌转速为120、150、180、210 r/min，初始pH自然，每间隔12 h取样，对发酵过程中菌丝生物量，胞外多糖得率，发酵液还原糖消耗以及相对溶氧进行跟踪检测。 　　雷 萍，等：不同搅拌转速和通气量对桑黄深层发酵培养的影响 　　1.5测定方法 　　将培养液2810 g离心15 min，收集沉淀物，用蒸馏水洗涤3次，80 ℃烘干至恒重，分析天平称量即为菌丝干重；离心所得上清液经0.45 μm滤膜过滤，加入3倍体积的无水乙醇，混匀，置于4 ℃下12 h沉淀，2151 g 离心醇沉液15 min，收集沉淀，80 ℃烘干至恒重，分析天平称量即为胞外多糖含量；发酵液还原糖含量测定采用DNS法[19]。相对溶氧通过仪器监测记录。各测定指标重复测定3次，取平均值。 　　1.6不同通气量对桑黄生长的影响 　　在20 L发酵罐中装液量60%（v/v），接种量10%（v/v），搅拌转速150 r/min，在温度28 ℃条件下分别调节1∶0.5、1∶0.65、1∶0.8 vvm 3种通气量，初始pH自然，对发酵过程中菌丝生物量，胞外多糖得