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不同消毒处理对竹芋组培无菌外植体获得的影响 　　摘要:以过渡栽培植株的侧芽或顶芽为外植体,研究了不同消毒处理对竹芋组培无菌外植体获得的影响。结果表明:采用抗菌素浸泡5 h、熏蒸12 min并配合常规消毒处理(75%酒精浸泡1 min;3.0%～5.0%的次氯酸钠和0.1%升汞1∶1混合溶液浸泡10～12 min)对外植体进行综合灭菌,能较快地杀灭竹芋外植体表面细菌,使初次接种污染率控制在20%以下。 　　关键词:竹芋;组织培养;消毒处理;污染率;外植体 　　中图分类号:S682.1+61文献标识码:A文章编号:1006-6500(2009)02-0006-03 　　 　　Effect of Different Disinfection Treatment on Sterile Explant Obtaining in Tissue Culture of Calathea spp 　　XIA Shi-yun1,FU Ren-sheng1,ZHANG De-lan2,MA Wu-yun2 　　(1.Tianjin Research Center of Agricultural Biotechnology,Tianjin 300192,China;2.Tianjin Agricultural College, Tianjin 300384,China) 　　Abstract:The effect of different disinfection methods on explant obtaining in Calathea spp was studied. The results showed that pre-treatment and antibiotic marinating for 5 h and suffocating for 12 min as well as ordinary disinfection for 12 min for surface disinfection could effectively control explant contamination. The contaminate rate with this method would be less than 20%. 　　Key words: Calathea spp;tissue culture;disinfection treatment;contaminate rate;explant 　　 　　竹芋(Calathea spp)是目前比较流行的多年生观叶常绿草本植物,市场需求一直呈递增趋势。目前,国内大多竹芋品种是从国外引进的。竹芋一般分?Y较少,用常规分株繁殖难以扩大生产,因此,研究竹芋组培快繁技术体系具有重要意义。 　　竹芋植物的芽大部分位于栽培基质内,且地下部分有较发达的通气组织,组织内部有大量的寄生或内生菌,在竹芋组培中,采用常规的酒精、HgCl2等溶液灭菌,只能杀死表面的细菌,无法渗入外植体内部,不能彻底杀灭组织材料的内生菌,在初代培养和增殖过程中易出现严重的细菌污染[1],如培养基表面出现多色的水渍样,有些底部呈现白色晕状;有时也出现真菌污染,如培养基表面出现各种霉菌,严重影响组培苗的正常生长,甚至导致死亡[1-7]。笔者以过渡栽培植株的侧芽或顶芽为外植体,采用抗菌素浸泡、熏蒸并配合常规消毒处理对外植体进行综合灭菌,能较快地杀灭竹芋外植体表面细菌;在诱导培养基中适量添加生物杀菌剂,能较大幅度地降低外植体的污染率,取得较理想效果。 　　 　　1材料和方法 　　 　　1.1材 料 　　市购盆栽“双线竹芋”、“青苹果”竹芋,购回后挖出,洗净基质并消毒处理,无土栽培2～3个月,每隔1周喷洒1次500倍多菌灵溶液,取植株萌动的顶芽和侧芽作试验材料。 　　1.2方 法 　　1.2.1预处理将外植体先用洗衣粉水浸泡30 min,自来水冲洗30 min。 　　1.2.2抗菌素浸泡在500～800倍多菌灵溶液中分别浸泡2,3,4,5,6 h,自来水冲洗干净。设未浸泡的为CK1。 　　1.2.3熏蒸将预处理与抗菌素浸泡后的外植体在密封玻璃容器中,用高锰酸钾∶甲醛=1∶2 熏蒸5,10,15,20 min后备用。设未熏蒸为CK2。 　　1.2.4常规消毒处理超净台上,用75%酒精浸泡1 min;在3.0%～5.0%次氯酸钠∶0.1%升汞=1∶1混合溶液中分别浸泡8,10,12,15 min,无菌水冲洗5～6次。 　　1.3 培养条件 　　取已消毒的外植体,剥离茎尖接种于适量添加生物杀菌剂的诱导培养基内。温度(25±2)℃,光照强度2 000～2 500 lx,光照周期14 h/d。10 d后观察污