不同处理方式对内生细菌R15定殖数量和辣椒疫病防治效果影响.docVIP

不同处理方式对内生细菌R15定殖数量和辣椒疫病防治效果的影响 　　摘要：为了检测不同处理方式对荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）R15在辣椒根部定殖数量和防治辣椒疫病效果的影响，利用重复伤根法、重复伤根接种法、重复浇灌尿素溶液法、重复灌菌液接种法处理接种R15的辣椒苗，测定各个处理组在第一次接种后5～60 d的定殖数量，以及在接种10、25、40、55 d对辣椒疫病的防治效果。结果表明，重复伤根处理对R15菌株的定殖量增加有限；重复伤根接种能使内生细菌的定殖量明显增加，但是多次伤根对植物体造成伤害，植株防治辣椒疫病的能力下降；重复浇灌尿素溶液使内生细菌的定殖量缓慢下降，但是防效提高不显著；重复灌菌液接种能使内生细菌R15在辣椒体内的定殖数量大于105.61CFU/g，防治效果维持在80%～100%之间。因此，生防菌R15的使用方法是在第一次接种后，每隔15～20 d在辣椒根部进行菌液灌根，可以高效防治辣椒疫病。 　　关键词：内生细菌；辣椒疫病；定殖；防效；接种方法；处理方式 　　中图分类号： S182；S436.418文献标志码： A文章编号：1002-1302（2017）07-0076-04 　　辣椒疫病是危害辣椒的主要病害之一，辣椒疫病俗称死秧病，该病害是一种土传病害，病原菌可以在土壤中长时间存活，使得该病害成为生产上最难防治的一种病害。从苗期到成株期都能引起严重的危害，在高温、高湿条件下可在短期内引起大面积死苗、烂叶和烂果，不仅严重影响了辣椒的产量和品质，甚至导致绝收，是一种毁灭性病害。目前防治辣椒疫病主要以化学防治为主，例如甲霜灵、三乙膦酸铝、氯唑灵、霜霉威盐酸盐等[1]。但长期使用这些杀菌剂容易引起病原菌的抗药性，导致用药量不断提高，同时容易造成药物残留、污染环境、威胁人类健康等问题。植物体内存在大量具有拮抗活性的菌株，它们对由病原真菌、细菌、寄生线虫引起的植物病害有着不同程度的防治作用，通过不同的生防机制，使植物免受或减轻危害，有些还具有促生作用。内生细菌由于定殖在植物体内，不易受环境影响，目前已经引起植物学家、微生物学家等的重视，成为研究的热门课题。近年来已从自然界中分离筛选到大量对辣椒疫病具有防控作用的生防菌[2-6]。 　　但目前利用内生细菌防治植物病害，还没有在农业生产上大面积推广应用，主要是因为应用效果不稳定。田间环境和植物体微生态环境中许多因子都会影响内生细菌防病作用的发挥。Weyens等认为内生细菌防效不稳定的原因之一是定殖量不稳定[7]。例如2株产生1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶的内生细菌DP24和XG32都能够定殖在辣椒体内，DP24和XG32在辣椒根部达到最大定殖量的时间分别为接种后7、12 d，随后逐渐下降，30 d后在根部检测不到这2种细菌的存在[8]。笔者所在实验室筛选到1株能有效防治辣椒疫病的内生细菌Pseudomonas fluorescens R15，它能稳定定殖在辣椒体内，并且在定殖量高于6.3×105 CFU/g，防治辣椒疫病的效果达到100%。但是定殖一段时间后，其定殖数量逐渐下降，防治效果也逐渐降低，定殖30 d后防治辣椒疫病的效果为70.8%，防治效果不太理想[9]。文才艺等研究了内生细菌EBS05在小麦体内的定殖动态及其对小麦纹枯病的防治作用，发现接种初期EBS05在小麦体内的定殖量逐渐增加，10～12 d定殖数量达到最大，防治效果最好，建议在应用EBS05进行小麦纹枯病防治时，分别于发病高峰期即冬前期和返青期的前10 d左右施药可达到理想的防治效果[10]。现阶段关于如何使内生细菌成功定殖，并确保一定的定殖数量以及达到良好的防治效果方面的研究尚未见报道。 　　内生细菌成功接入宿主植物的技术已经成熟，例如通过伤根、灌根、蘸根、喷洒、涂抹、浸种等人工接种方法能使内生细菌成功定殖在植物体内。内生细菌采用不同的接种方式以及宿主的健康状况对内生细菌在植物体内的成功定殖并发挥作用起着决定性作用[11]。目前还未见报道关于使接种内生细菌在宿主体内稳定保持一定菌体数量的处理方法。本研究通过对成功定殖内生细菌的辣椒苗进行不同处理，从定殖数量和对辣椒疫病的防效上研究了这些处理方法对内生细菌R15菌株在辣椒根部的定殖量及防治效果的影响，为内生细菌在农业上更有效防治病原菌提供理论依据及技术支持。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料及菌种培养 　　菌株R15经鉴定为荧光假单胞菌Ⅱ型（Pseudomonas fluorescens biovar Ⅱ）；定殖试验和防效试验表明其具有在辣椒体内定殖的能力和防治辣椒疫病的特性[9]。 　　辣椒疫霉菌孢子悬浮液的制备：辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）由山东农业大学植物保护学院张修国教