不同地理种源丹参根系分泌物GC―MS比较分析.docVIP

不同地理种源丹参根系分泌物的GC―MS比较分析 　　摘要：为了阐明丹参根系分泌行为与遗传和环境的关系，以不同地理（四川省、山东省、河南省）种源丹参组培苗和根段材料，分别进行无菌和沙土培养。并利用GC-MS技术对丹参根系分泌物进行组分分析，从组培和盆栽丹参根系分泌物中分别检测出19种、36种物质，其中组培丹参根系分泌物以酚类、酯类为主。各种源丹参根系分泌物中有其特殊的成分，但所有分泌物中均含有十六烷棕榈酸、硬脂酸油醇酯、松油醇等，只是含量不同。土培条件下，根系分泌物中烃类、醇类、醛类在种类及含量上均有所增加，而酚类、酯类明显减少，尤其是酚类物质，增加2种酸类、2种甾醇类和1种萘胺、2种酰胺类组分，但未检出组培丹参根系分泌物中的1种酮类和3种脂肪胺类物质。研究表明，丹参根系分泌物的组成和相对含量受遗传和环境的影响，其中有机酸、甾醇类和酰胺类是环境胁迫下的主要分泌物，本研究结果将为提高丹参根际土壤养分高效利用提供一定参考。 　　关键词：丹参；根系分泌物；组培法；土培法；气相色谱一质谱 　　中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1002―1302（2016）01―0301―05根系分泌物是植物与环境相互作用的媒介，在植物间、植物与微生物问的相互作用中具重要的生态学意义，其组成受遗传和环境的双重调控，在植物根系化感作用及根际营养调控中起着重要作用。研究表明三七、人参、西洋参、地黄、苍术等的根系分泌物具化感作用。丹参（Salvia mihiorrhiza Bge.）是多地栽培的药用植物，其中四川、河南、山东是丹参药材的道地产区。已有研究表明，丹参虽具广泛的土壤适应性，但不同产地丹参的有效成分和无机元素含量差异明显，并与遗传特性及土壤因子相关。本试验以四川省、河南省、山东省种源丹参为试验材料，研究不同遗传背景丹参在MS培养基和盆栽过程中根系分泌物的差异，旨在为深入研究丹参根系分泌物产生机制提供参考。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　丹参种源于2012年12月分别采自四川中江石泉乡、山东临沂吕匣镇，河南方城拐河镇3个不同产区，根段繁殖，翌年开花后，经鉴定均为唇形科植物丹参。沙土盆栽，完整挖出植株根系，剥取距离根表0～4 mm内的土壤约200 g，置阴凉处自然风干，研磨，过60目筛备用。 　　组培苗取上述盆栽植物作外植体，经组织培养获取丛生芽，于1/2MS+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IBA（含蔗糖1.5%，琼脂0.8%，pH值5.8～6.0），温度（25±2）℃，光照度约5 000 k，光照时间11 h/d条件下培养50 d后，取其根部的培养基备用。 　　1.2试剂与仪器 　　仪器：Agilent GC6890/MSD5973气相色谱-质谱联用仪；JA5003型电子天平（上海良平仪器仪表有限公司）；KQ5200超声仪（昆山市超声仪器厂有限公司）；RE5203旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；TDZ5-WS台式低速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）。 　　试剂：乙酸乙酯（分析纯）（成都科龙试剂化工厂，批，二氯甲烷（成都科龙试剂化工厂，批号2013093001），甲醇（分析纯）（成都科龙试剂化工厂，批，无水硫酸钠（分析纯）（成都科龙试剂化工厂，批。 　　1.3试验方法 　　1.3.1培养基中根系分泌物的提取 选取长势一致的丹参组培苗（山东），剥离其根部附近的培养基，等分成3份，分别置于圆底烧瓶中，一份加入200 mL蒸馏水及100 mL乙酸乙酯于90℃加热融化后回流提取30 min；另一份加入相同的溶剂后于100 W、40℃超声提取30 min，放置冷却后，分别分离乙酸乙酯层，将琼脂层重新转入原烧瓶中，用1 mol/L NaOH将pH值调至9，各加入100 mL乙酸乙酯，分别以上述同样的方法提取30 min，合并各样品2次乙酸乙酯提取液；最后一份培养基中加入200 mL甲醇，于100W，40℃超声提取45 min，以5 000 r/min离心10 min，分离上清液；将3份提取液用无水硫酸钠脱水后，于35℃减压浓缩至干，以二氯甲烷溶解并定容至1 mL，用于GC-MS分析，确定提取方案。以最佳方法分别制备山东、四川、河南丹参组培苗根系分泌物供试液。并以未使用过的MS培养基制备空白供试液。 　　1.3.2根际土壤浸提液的制备 分别称取3种丹参根际土各约50 g，置500 mL锥形瓶中，按1：5比例加入蒸馏水，于30℃超声提取30 min，离心，上清液用1 moL/L HCl调pH值至4，以等体积的乙酸乙酯萃取2次，分离乙酸乙酯层，水相用1 mol/L NaOH调节pH值至9，再用等体积乙酸乙酯萃取2次，合并2次所得乙酸