不同提取方法对北五味子多糖提取率影响.docVIP

不同提取方法对北五味子多糖提取率的影响 　　摘要：考察了不同提取方法对北五味子[Schisandra chinensis （Turcz.） Baill]多糖提取率的影响。分别采用回流法、微波辅助法、闪式法对北五味子多糖进行提取，通过可见-分光光度法测定其含量，设计响应面试验对其最佳方法的工艺进行优化。闪式法多糖提取率高于回流法和微波辅助法，其最佳工艺为料液比1∶20（m∶V），提取时间127 s、提取电压190 V、提取温度78 ℃，在此条件下北五味子多糖的提取率达到20.97%。不同提取方法对多糖的提取率影响较大，闪式法多糖提取率高，耗费时间短，溶剂用量少。 　　关键词：北五味子[Schisandra chinensis （Turcz.） Baill]；多糖；回流法；微波辅助法；闪式法 　　中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）01-0159-05 　　北五味子[Schisandra chinensis （Turcz.） Baill]是五味子科植物五味子的干燥成熟果实，主产于吉林、辽宁、黑龙江、内蒙古等地[1]。五味子是著名的滋补性中药，具有收敛固涩、益气生精、补肾宁心的功效[2，3]。现代药理研究表明，北五味子多糖是其主要活性成分之一，具有提高机体免疫力、保肝、抗氧化、抗肿瘤、抗疲劳等生理活性[4，5]。因此，研究北五味子多糖的最佳提取工艺，对新药和功能性食品的开发具有重要的学术意义和利用价值。 　　北五味子多糖的传统提取多采用回流法，提取时间长，通常需要数小时，且溶剂耗费量大。近年来，微波辅助法[6，7]、闪式法[8，9]等新技术已经广泛应用于天然药物的提取，这些方法具有时间短、溶剂用量小、提取率高、简单易行等特点，但鲜见关于采用闪式法提取北五味子多糖的报道，本试验采用上述3种方法同时进行研究，优选北五味子多糖的最佳提取方法及其工艺条件，为工业化生产北五味子多糖提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料、试剂与仪器 　　北五味子购买于吉林省通化市，产地为长白山，经过吉林化工学院环境与生物工程学院隋新教授鉴定为北五味子[Schisandra chinensis （Turcz.） Baill.]的干燥果实。所用试剂均为分析纯。所用仪器有：722型可见分光光度计（上海欣茂仪器有限公司），XH-100A型微波合成/萃取仪（北京祥鹄科技发展有限公司），JHBE-50S型闪式提取器（河南金鼎科技发展有限公司），RT-08型多功能粉粹机（荣聪精密科技有限公司），RE-52A型旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），SHZ-D型循环水式真空泵（河南省巩义市英峪仪器一厂）。 　　1.2 多糖含量的测定 　　1.2.1 葡萄糖标准曲线的绘制 用葡萄糖作为标准品，采用苯酚-硫酸法[6，10]绘制标准曲线。准确称量105 ℃干燥至恒重的葡萄糖标准样品100.00 mg，加去离子水溶解、摇匀，定容到100 mL，制成1.00 mg/mL贮备液，取出25 mL上述贮备液置于250 mL容量瓶中，制成0.1 mg/mL的葡萄糖标准溶液。 　　分别精确量取上述溶液5、10、15、20、25、30、35 mL，置于7个50 mL容量瓶中，加去离子水摇匀定容。分别取1 mL，置于7个25 mL的具塞比色管中，加入新制成5%的苯酚溶液1.0 mL，再迅速加入5 mL浓硫酸，充分摇匀，另取1 mL去离子水做空白对照。于25 ℃放置30 min，在490 nm处测定吸光度值，以吸光度值为纵坐标，葡萄糖质量浓度为横坐标，绘制葡萄糖标准曲线。 　　1.2.2 多糖含量的测定 精确称量精制干燥的北五味子多糖50 mg，用去离子水溶解后定容到100 mL，制成0.50 mg/mL溶液，取出4 mL上述溶液置于25 mL容量瓶中，制成80 μg/mL的多糖贮备液，按照绘制标准曲线的方法测定吸光度值[11-13]。按以下公式计算换算因子： 　　f=W/CD 　　式中，W为多糖质量（μg）；D为多糖的稀释因子；C为多糖溶液中葡萄糖的浓度（μg/mL）。测得换算因子f为1.76。根据该因子计算多糖质量。 　　多糖含量=多糖质量/药材质量×100% 　　1.3 北五味子多糖的提取 　　1.3.1 回流法 将北五味子粉碎，过孔径不同的筛子， 于60 ℃烘干至恒重，精确称取10.0 g，平行称量3份。根据试验设计，按照一定的料液比（m∶V，g/mL，下同）加入去离子水，在一定的温度下回流提取一段时间。提取液经4 000 r/min离心10 min，抽滤，药渣重新加入适量去离子水洗涤，重复上述提取液的离心操作2次，合并3次滤液，用旋转蒸发仪浓缩到原体积的1/5，加入无水乙醇至体积分数为80%，静置，冷冻过夜