中医活血化瘀法影响骨折愈合基础研究.docVIP

中医活血化瘀法影响骨折愈合的基础研究 　　【摘要】本文通过分析复元活血汤的处方和药理，探讨活血化瘀法对骨折愈合的影响，并以实验证明猜想的正确性，并对中医药治疗骨折方法推广提出展望。 　　【关键词】中医活血化瘀；骨折愈合；基础研究 　　【中图分类号】R683.41 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）05-0130-02 　　骨折是指骨的连续性和完整性遭到破坏，中医治疗骨折以活血化瘀为基础。本文以研究中药制剂对大鼠成骨细胞的功能影响为基础，探讨中医活血化瘀疗法对促进骨折愈合的作用[1]。 　　1活血化瘀法的机理研究 　　1.1复元活血汤的处方及药理分析 　　1.1.1复元活血汤的处方 　　大黄50g、桃仁15g、柴胡25g、天花粉15g、当归15g、红花10g、甘草10g、穿山甲10g。该处方方源为《医学发明？中风同堕坠论》[2]。 　　1.1.2药理分析 　　复元活血汤具有镇痛、抗炎症、改善微循环的作用。复元活血汤对促进微循环血流速度，增加毛细血管网的通透性，清除血凝块以促进代谢，为断端提供良好的营养供应，以加速骨折愈合[3]。 　　大黄性寒、味苦，主治实热便秘、热结胸痞、湿热泻痢、黄疸、淋病、水肿腹满、小便不利、目赤、咽喉肿痛、口舌生疮、胃热呕吐、吐血、咯血、衄血、便血、尿血、蓄血、经闭、产后瘀滞腹痛、症瘕积聚、跌打损伤、热毒痈疡、丹毒、烫伤。 　　桃仁性寒、味微苦，主治破血行瘀、润燥滑肠、治经闭、症瘕、热病蓄血、风痹、疟疾、跌打损伤、瘀血肿痛、血燥便秘。 　　从以上资料分析，复元活血汤中药材以寒性为主，主治活血化瘀。 　　1.2活血化瘀治愈骨折的机理 　　1.2.1提高成骨细胞活性 　　内外骨膜和骨髓基质内的充质始祖细胞分化为成骨细胞是骨组织工程基本要素。成骨细胞的主要作用是合成分泌胶原、糖蛋白，形成骨基质。本研究采用MMT法观察到含复元活血汤血清对促进成骨细胞增殖作用效果显著；采用PNPP法观察该血清对成骨细胞分化功能的作用，随时间推移效果逐渐加强；观察血清对促进成骨细胞矿化结节作用明显；定量检测成骨细胞碱性磷酸酶数量证明该血清能够促进成骨细胞AKP的分泌与合成。故证明中医活血化瘀法能有效提升成骨细胞功能。 　　1.2.2改善血液循环和流变学性质 　　目前公认最强促血管形成因子是血管内皮生长因子，在血管内皮细胞上内皮生长因子与特异性受体的结合从而促进序贯生成，是血管再生的重要方法。研究表明，中药活血化瘀功能能够降低血液粘稠度并提高骨折愈合的VEGF表达。临床研究证明，很多中药在骨折愈合中都具有调高VEGFmRNA水平，促进骨折愈合。本研究证实，复元活血汤在降低血液粘稠度方面与剂量成正比关系。 　　1.2.3促进骨生长因子分泌 　　本研究证明骨生长因子如BMP、VEGF、FGF、PDGF、IGF-1/2等都在骨折愈合中有重要作用。实验中观察显示活血化瘀对大鼠成骨功能中TGF-β1表达具有良性促进作用，成骨细胞是骨吸收刺激因子PTH前列腺素等的直接作用者，因为成骨细胞表达它们的受体，成骨细胞提供了向破骨细胞传递骨吸收信号的“第二信使”激活破骨细胞和调节骨吸收从而提高软骨内成骨率，起到促进骨折愈合作用。 　　2实验过程及数据 　　2.1成骨细胞的鉴定 　　成骨细胞分离之后在显微镜下呈球形，细胞膜透亮，细胞核于细胞内呈黑色。细胞贴壁后变大，同时核增大；在数天之后细胞呈现多样性，并且细胞间有连接情况发生。 　　2.2 MMT法测血清最佳含药浓度 　　采用酶标仪检查血清吸光度，以波长490纳米比较，含药浓度5%、10%、15%、30%没有明显差异，而20%浓度血清则差异明显。 　　2.3 MMT法测成骨细胞增殖功能 　　实验结束前加入30μL0.4%MMT，静置1小时，在酶标仪波长570纳米比色，结果显示血清对成骨细胞增殖作用明显，并随时间推移作用愈加明显。 　　2.4 PNPP法检测成骨细胞分化功能 　　采用PNPP法，在酶标仪波长400纳米比色，分别于第2、3、4、5天比较，结果显示随时间推移，含药血清对成骨细胞分化功能有明显促进作用。 　　2.5 以矿化结节计数法检测成骨细胞矿化功能 　　在实验进行的第2、4、6、8、10、15天用染色体数比较矿化结节数，结果显示随时间推移，含药血清对成骨细胞矿化有明显促进作用。 　　2.6 AKP法检测成骨细胞碱性磷酸酶 　　通过公式AKP=测定管吸光度×标准管酚含量÷标准管吸光度÷蛋白质量计算，结果显示随时间推移AKP含量增加，证明含药血清对促进骨细胞合成与分泌碱性磷酸酶有促进作用。 　　3讨论 　　3.1实验评价 　　本研究使用血清药理学方法培养大鼠成骨细胞，并使用MMT法、PNPP法和AKP