乙型肝炎病毒诊断中分子诊断技术应用探讨.docVIP

乙型肝炎病毒诊断中分子诊断技术的应用探讨 　　摘 要： 根据不完全数据统计，我国患有乙型肝炎病毒患者占有较大比重，全国约有将近9300万人。乙型肝炎病毒属于DNA病毒的一种，具有较强的传染性，但是其并不遗传。乙型肝炎病毒携带者的正常工作、学习、生活均会受到较大影响，探寻该病毒的有效诊断方法显得尤为重要。 　　关键词：乙型肝炎病毒 病毒诊断 分子诊断技术 　　中图分类号：R512.6 文献标识码：A 文章编号：1003-9082（2016）11-0274-02 　　就目前而言，我国乙型肝炎病毒感染者多属于慢性肝炎，该病毒具有较强的生存能力，能够耐高温、耐寒，甚至对紫外线和高浓度消毒剂等也具有明显抗性，该病毒能够在人体存活几年、几十年，临床治疗难度较大。[1]患病时间越长患者患有原发性肝癌或者肝硬化风险越高。近年来，将分子诊断技术应用于乙型肝炎病毒的临床诊断中，这对于探寻新的预防、治疗方法具有重要意义[2]。 　　一、乙型肝炎病毒的结构特点 　　乙型肝炎病毒属于DNA病毒的一种，这种病毒主要感染于人体，并且具有比较活跃、强烈的复制能力，传染率高[3]。乙型肝炎病毒的结构特点包括很多方面，首先基因序列具有明显的多变性；其次结果不是完全统一的，也不是完全双链环状的；最后，在该病毒的蛋白质编码区的不同病毒结构活跃性明显，能够进行序列调整[4]。 　　二、分子诊断技术 　　首先，PCR技术。分子诊断技术包括不同方面，其中最值得一提的技术即为PCR技术，这一技术主要用于扩增，在病毒诊断实验中要保证其阴阳性放置正确，并且相互对应放置。可以用于测定的方式包括普通的PCR技术、竞争性PCR技术和实验研究比较常用的两种技术即套式PCR和免疫杂交PCR技术[5]。将PCR技术应用于实验研究中，有研究专家选取两种不同的检测技术对乙型肝炎病毒进行测量诊断[6]，其中一项检测技术即为本文提到的PCR技术，与之对照实验研究的另一项技术即为常规定性法，实验结果显示PCR技术检测结果更准确，其对于病毒的活性及特征等方面指标检测灵敏度更高，更能够准确判断患者的实际患病情况和传染情况。 　　其次，核酸杂交技术。这一项检测技术的最大优点即为对于技术要求和设备要求均较低。通常检测人员只需要选取实验所需的标本即可，将其放置于实验所需的硝酸纤维素薄膜上即可，观察所选标本的形态并将其详细准确记录。检测人员将乙型肝炎病毒DNA寡核酸探针放置于选取的实验样本中，保证两者能够相互融合，实现杂交效果。经过这一实验操作后检测人员能够直观的看出所选的检测标本中是否存在乙型肝炎病毒，根据两者融合情况能够对病毒进行半定量测量。将这一检测技术方法与上述提到的PCR检测方法相比较而言，其虽然检测结果的特异性较好，但是从检测结果或者是病毒的活性检测灵敏度方面来看的话较差，而且这一检测方法的另一局限性是检测步骤较多、更为繁琐，一旦出错将会影响整个实验的检测结果。 　　最后，支链DNA技术。这一项检测技术与上述两项检测技术均不相同，其在行检测操作过程中需要共同应用支链DNA分子和另外一项比较重要的探针，这里需要重点提到的即为探针部分，其主要由三种不同探针组成，其中包括靶探针1和2，还有另外一个捕获探针。在乙型肝炎病毒诊断中这三个探针具有重要作用，检测人员选取待测核酸样本，靶探针1和2在实验检测操作中分别与样本-捕获探针和样本-支链DNA分子进行相互融合、杂交活动。完成上述操作后能形成酶催化反应，从而进一步判定样本的核酸含量情况，对乙型肝炎病毒进行有效判定。支链DNA技术的优势主要表现在其在行乙型肝炎病毒检测实验过程中能够保证实验反应的稳定性，同时这一检测技术涉及到三种不同探针，能够进行重复病毒检测，根据每次不同检测结果进行对比分析，能够判断最终有效检测结果，能够保证实验结果的可靠准确性。但是相对应的这一检测方法也存在一定局限性，其检测成本较高，同时其与PCR技术最大的差异就是放大倍数过少，不能够将这种检测方法适用于临床所有病症的诊断中，检测范围过于狭窄。目前，我国仅有较大的部分医院能够进行支链DNA技术检测操作。 　　三、分子诊断技术应用于乙型感染病毒诊断的意义 　　首先，可以用于乙型肝炎病毒感染的早期诊断。从传统意义上来讲，我国大部分医院在进行乙型肝炎病毒感染的临床诊断中多参考临床比较常见的免疫学指标变化情况，其中主要包括抗HBc指标、抗HBs指标和临床病症判断参考比较重要的HBsAg指标等。相关研究专家表明[7]，对于一般典型的乙型肝炎病毒感染患者的临床诊断是可以参考免疫学指标变化情况的，但是进一步研究发现，其仅能够检测出病毒的表型指标情况，应用于病症的临床诊断中存在误诊或者漏诊的风险，对于病症较轻或者刚感染的患者早期诊断是不利的。当前，将分子诊断技术应用其中，能够最大程