中药致突变作用讲解材料.pptVIP

第七章 中药致突变作用;遗传毒性(genetic toxicity)：对基因的损害能力。包括对基因组的毒性作用引起的致突变性及其他各种不同的效应(如原发性DNA损伤)，包括致突变性。 遗传毒性的效应可能转变为突变，也可能被修复。;研究中药致突变作用目的或内容： 致突变的中药及其成分 致突变作用的机制 检测及其评价致突变健康危害的方法 ;第二节 中药的致突变作用;第三节 中药致突变作用的机制及其后果;一、引起突变的DNA变化;二、引起突变的细胞分裂过程的改变;三、其他改变;四、突变的后果;DNA损伤修复障碍;DNA损伤修复障碍;第四节 机体对致突变作用的影响; 接触化学致突变物≠致突变作用 在个体之间，反应有很大差异 个体对致突变物敏感性差异的原因： 代谢酶的遗传多态性 修复能力差异 宿主因素;细胞处理广泛的DNA损伤有两个过程： 如果损伤是广泛的，细胞发生凋亡； 如果损伤不十分严重，细胞进行多种修复，使NDA回到未损伤状态(无错误修复)或到一个有所改善但仍发生了改变的状态(错误倾向修复)。 大多数修复过程的基本原则是：损伤识别，移除损伤片段，修复DNA合成和连接。;化学致突变模式：损伤-修复-突变 修复功能饱和或能力不足 如肿瘤发生率每年约为1% 吸烟者中患肺癌约有10% 先天性(遗传因素)，即遗传多态性 后天性(生活方式)，;第五节 观察中药致突变作用的基本方法;DNA的基本特性具有普遍性，故用非人类检测系统预测对人类的遗传危害性。 指示生物：病毒、细菌、霉菌、昆虫、植物、培养的哺乳动物细胞和哺乳动物 没有一种致突变试验能涵盖所有的遗传学终点，常用一组试验配套进行检测。 2、成套观察项目： 采用何种方法，根据需要 一般包括基因突变、断裂作用、重组作用、非整倍体或多倍体测定。 受试物在其中任何一种试验中出现可重复的阳性结果，即可认为是遗传毒性。;入选遗传毒理学成套观察项目的原则： 1)一组试验系统应包括每一类型的遗传学终点 2)配套试验应包括多种进化程度不同的物种 3)体内与体外试验结合 如ICH，1997药品遗传毒性评价组合： 细菌基因突变； 体外哺乳??物细胞染色体畸变或体外小鼠淋巴瘤细胞tk试验； 体内啮齿类造血细胞染色体损伤试验;二、常用致突变试验;1、细菌回复突变试验(Ames试验) (bacterial reverse mutation assay) 以营养缺陷型的突变体菌株为指示生物检测基因突变的体外试验。 常用菌株：组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门菌 色氨酸营养缺陷型大肠杆菌 原理：某个调控组氨酸合成的基因发生了点位突变，丧失了合成组氨酸能力，必需依赖外源性组氨酸才能生长。突变菌株可被各种诱变因素诱导，回复突变为原养型，在不含组氨酸的选择培养基上生长成可见的菌落。如果选择培养基上回变菌落数显著超过了自发回变数，即可判断受试物为鼠伤寒沙门菌的致突变物。; 图 Ames试验原理;Ames试验有多种菌株，组氨酸突变部位不同、方式不同，附加的基因型改变也不同，不同的菌株对不同化学致突变物的检出能力不同。 因此：试验中的菌株也要配套！ Ames试验根据菌株特性，可测定：碱基置换、移码突变或两者。 ICH推荐菌株： ①TA98、②TA100、③TA1535、 ④TA1537或TA97(TA97a) ⑤ TA102或E.Coli WP2uvrA、 E.Coli WP2uvrA(pKM101) 我国：TA100、TA98、TA97、TA102（1983年）;Ames试验方法： 点试验法：一般用于预试验 平板掺入法：标准方法 预培养法：提高测试的灵敏度 ;哺乳动物细胞基因突变试验 (mammalian cell gene mutation assay) 基因正向突变试验(即野生型基因失活的突变) 常用方法： 小鼠淋巴瘤(L5178Y)细胞胸苷激酶位点(tk)突变检测 中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、中国仓鼠肺(V79)细胞次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶位点(hgpt)突变检测 中国仓鼠卵巢细胞的AS52细胞株黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖基酶位点(gpt)突变检测 可检测：座位内碱基置换、缺失、移码、重排;附：其它的致突变试验检测生物;2、染色体畸变测试--微核试验;微核试验的细胞： 1)植物细胞：紫露草花粉母细胞、蚕豆根尖 2)哺乳类动物细胞：骨髓细胞、肝细胞、脾细胞、肺细胞、淋巴细胞、红细胞、精子、鼻及胃粘膜上皮细胞、皮肤细胞等 3)非哺乳类动物细胞：鱼红细胞、蟾蜍红细胞 常用：啮齿类