陕西省汉族人群的亚群分析及藏族Y-STR多态性研究.pdf

nucleotide 标记的代表是单核甘酸多态性(single 的置换、插入或缺失而形成的，是美国MT1r提出的新一代多态性标记系统l叭， 近年来成为多种研究的焦点。虽然SNP的多态性位点是最多的，能比STR提供 更全面的基因信息，但是STR还是以其独特的优点保存下来，仍被广泛的研究． 微卫星DNA,由于重复单位较简单，故又称简单重复序列(simplerepeat sequencesofrepeats，SSR)．在生物界乃至不同种群、人群 sequence，SRS；simple 中存在着千差万别，其物质基础在于基因组DNA的多态性。STR广泛的存在于 人类基因组中，越来越受到生物科学工作者的重视。人类基因组STR是由几个 碱基对作为核心单位串联重复形成的DNA序列，由于重复单位及其重复次数不 同，使其在不同种族、不同人群之间的分布具有很大的差异性，构成了STR的 遗传多态性。在基因组中，平均每15～20kb就有一个STR位点，占基因组的 10％，多存在于非编码区及内含子中，重复单位为2～6 bp，重复次数一般10～ 60次，片段大小在100～500bp，并按孟德尔规律呈共显性遗传001。据GeneBank 等数据库资料统计，人类23对染色体上至少分布着7901个STR位点，每对染 色体的STR位点分别超过100个，其中1、2号染色体的位点均超过600个，性 染色体上的已知位点数在264个以上。随着人们对STR的进一步研究，其数目 还会不断增加。 微卫星DNA的检测有多种方法：第一，DNA指纹图谱法。根据不同位点的 微卫星DNA有相同重复序列单位的特点，用一种核心重复序列制成探针，可以 检测到许多不同位点的微卫星，经Southern杂交，放射自显影在X胶片上显现DNA 指纹图谱，该图谱不表示任何特定微卫星位点，而是许多微卫星位点的集合状态。 每个个体至少可显出18条以上的带纹，具有高度的个体特异性，并且这些条带以 孟德尔遗传方式在亲代问传递。该技术可用于物种间遗传距离分析，从而确定亲 缘关系、预测杂交优势及品系纯度鉴定等研究领域。第二，聚丙烯酰胺凝胶电 泳检测法。根据微卫星两端的侧翼互补序列合成引物，然后用PCR扩增出长度 不同的片段，这种PCR扩增的不同长度片段用高分辨率的聚丙烯酰胺凝胶电泳来 区分，最后用银染得到结果。该法的分辨率、灵敏度明显高于琼脂糖电泳、放射 自显影方法，且操作时间短，在凝胶中还可以加入诸如尿素等变性剂来减少异源 双链的形成。目前该技术在基因图谱构建、基因定位、尤其在法医学领域普遍得 2 到应用。第三，毛细管电泳。毛细管电泳法是近几年发展起来的高效快速的分 离分析技术，此法先以PCR扩增含有微卫星位点的目的DNA片段为基础，然后利 用该技术分离分析。毛细管电泳法主要是快速、微量、分辩率高、重复性好、易 于定量和适合自动化检测等优点。该技术能在20分钟内分离长达几千Kb的DNA 片段，对于外显子大小的DNA片段，其分辨率可达Ibp。该技术目前主要应用于 核酸定量、基因突变的检测、遗传病诊断等方面，它与PCR和其他技术的结合将 会有逐渐取代传统的琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的趋势。随着激光检测仪 的引入，将会进一步提高分析灵敏度及分辨率。但由于该技术对设备和成本要求 较高，在许多领域还未得到应用，目前该技术主要用于人类疾病的检测。第四， 成引物，进行微卫星DNA位点的扩增，然后再用已知的限制性内切酶消化扩增 产物，消化后的片段通过凝胶电泳分离，并形成连续谱带，直接根据电泳条带进 行分析。与其它检测技术相比，RFLP检测数量大，可以根据电泳图谱直接分型， 非等位基因不存在上位效应。该技术已经广泛用于基因检测、定位和群体遗传学 研究中。第五，多重PCR微卫星荧光标记全自动基因组扫描。多重PCR技术是指 在同一PcR反应体系中对同一样本采用多种引物同时进行扩增。几种不同颜色的 荧光染料标记微卫星DNA引物，可以将多种不同荧光标记和不同扩增片段的PCR 产物在同一加样孔中电泳，并且可将待测PCR产物与DNA分子量标准同时上 样，通过测序凝胶电泳，用Gcnescan等软件进行图像分析，精确计算出微卫星等 位基因片段大小。该方法具有产量高、成本低、快速简便等优点，将为群体遗传 学等大工作量的研究提供广阔的应用前景。 2、STR在法医