大学生创新创业训练项目中期检查书-石河子大学.DOCVIP

大学生创新创业训练项目中期检查书 项 目 名 称 新疆布鲁氏菌流行株免疫保护性抗原筛选及鉴定 项 目 编 号 201410759072 项目负责人 李明奇 所 在 学 院 动物科技学院 资 助 总 额 1 万元，已拨款额 0.5 万元 起 止 年 月 2014 年 4月至 2015 年 4月 电 话 E-mail 280405447@ 填 表 日 期 2014年12月14日 石河子大学填 写 说 明 1．中期检查报告由正文和附件两部分组成，正文部分请按表格要求填写，并可根据需要加页，要求层次分明、内容准确。项目执行过程中的进展或研究成果、计划调整情况等，须在报告中如实反映。 2．对不按要求填报本中期检查书，或项目执行不力，或研究内容调整不当而影响项目顺利开展的，学校将中止拨款。 3．院系专家组认真评审，签署意见后，按时将本检查书(一式二份)报送项目管理办公室。一、项目主要进展（附已发表论文首页或其他成果的复印件） 一、进展情况: 1.制定并优化研究方案 通过双向电泳技术筛选获得新疆垦区布鲁氏菌流行株与M5-90疫苗株的差异蛋白；利用分子生物学方法构建差异蛋白的原核表达系统；通过western-blot和ELISA方法对差异表达蛋白进行筛选，以期区分疫苗免疫和自然感染，为新疆地区布病的防控提供技术支持。 2.开展的实验研究 （1）根据GenBank中公布的羊种布兽氏菌16M基因组数据，针对前期通过双向电泳技术获得的19种差异蛋白，利用Primer 5.0软件设计了19对相应的引物。 （2）差异蛋白相应基因的克隆 通过PCR扩增获得了相应大小的目的条带，切胶回收后，连接PMD18-T载体，成功获得了18个差异蛋白相应基因的克隆载体。 （3）原核表达载体的构建 相应基因与原核表达载体pET-28a连接后，转化大肠杆菌DE3感受态细胞，目前获得了15个相应的原核表达载体，其中有8个经聚丙烯酰胺凝胶（SDS）检测可确定可表达相应大小的差异蛋白。 二、主要成果： 1、19对差异蛋白基因引物的设计 BMEII0735上 GGATCCATGGTTCGCGAAATTTTGATGAC BMEII0735下 CTCGAGTTAGTTCTTGACGGATAGCCAGCG BMEI0855上 GAGCTCATGCCCATAGAAATTCTCATGC BMEI0855下 CTCGAGTTAAGCGGTATAGGTAACGGCT BMEI1069上 GGATCCATGACAAGAAGTGAAGGTTTGAA BMEI1069下 CTCGAGTCAAGCCTCTTCGGACTT BMEII0792上 GGATCCATGAGATTGCCCCTTCCAC BMEII0792下 CTCGAGTTATCTCGGCATAAGTCTCGAA BMEI0580上 GGATCCATGAAAATGCCGCTGAATATCG BMEI0580下 CTCGAGTTATTTCTTACCCTGTTCGGC BMEI0600上 GGATCCGTGCCGCCCTTTGTTGACT BMEI0600下 CTCGAGTCAGGGCTGCGCCTCCGG BMEI1063上 GGATCCATGGACGGGCAGCAAAGC BMEI1063下 CTCGAGTCAGGCGCTTTCGTTCTTG BMEII0893上 GGATCCATGAAATTGCAGGAGGAT BMEII0893下 CTCGAGCTATTCCGCTGCAGTAATTT BMEI0742上 GGATCCATGGCAAAGAGTAAGTTTGAACGT BMEI0742下 CTCGAGTTACTCGATGATCGACGAGACG BMEI1827上 GAGCTCGTGTGCCA