9第九节发酵工程下游技术发展跟发酵液的预处理.pptVIP

第九章 发酵工程下游技术发展及发酵液的预处理 下游技术（工程） ：对于由生物界自然产生的或由微生物菌体发酵的、动植物细胞组织培养的、酶反应等各种生物工业生产过程获得的生物原料，经提取分离、加工并精制目的成分，最终使其成为产品的技术。 下游加工过程的重要性。（组成、费用和关注程度） 1.组成：下游加工过程是生物技术的重要组成部分，发酵液或反应液需要经过下游加工过程才能成为成品； 2.费用：传统发酵工业中下游部分的费用占整个工厂投资费用的60％，而对重组DNA生产蛋白质等基因工程产品，下游加工的费用可占整个生产费用的80％－90％； 3.关注程度：英国政府工业部于1983年发起生物分离计划（BIOSEP），专门研究下游加工过程；1987年英国化学工业会召开了专门讨论下游加工过程的国际会议；我国也于1989年在济南召开了一次专门会议；近十年来国内外有关生物分离或蛋白质纯化的专著陆续出版。 二、下游加工技术的特点 1.发酵液的复杂性造成分离上的困难性。 粗原料中带入大量的不参与发酵过程的可溶性杂质和不溶性悬浮物，给下游过程的分离提取带来了不小的困难，增加了下游操作成本，包括发酵废液的处理成本  2. 欲提取的产物通常浓度低且很不稳定。一些新兴生物技术产品，待处理物料中产品浓度很低，往往低于杂质含量，如L—异亮氨酸为2.4％，青霉素为3.6％，每千克产品中核黄素仅含几克、胰岛素仅含几十毫克，而且对热、PH、有些甚至对光不稳定。 生物活性物质的活性还易受温度、pH、金属离子、无机盐浓度、有机溶媒等环境因素的影响。制约了下游技术的可选范围。 3. 多为分批操作，各批发酵液不尽相同，要求下游加工有一定弹性。 五、发酵工业下游技术的一般工艺过程 下游加工过程由各种化工单元操作组成。由于生物产品品种多，性质各异，故用到的单元操作很多，其中如蒸馏、萃取、结晶、吸附、蒸发和干燥等属传统的单元操作，理论比较成熟，而另一些则为新近发展起来的单元操作，如细胞破碎、膜分离和色层分离等，缺乏完整的理论，介于两者之间的有离子交换过程等。 1. 一般工艺过程 一般说来，下游加工过程可分为4个阶段： （1）预处理和固液分离 ：目的是除去发酵液中的菌体细胞和不溶性固体杂质（离心和过滤）。 （2）初步分离 ：目的是除去与产物性质差异较大的杂质，为后道精制工序创造有利条件 （萃取、吸附、沉淀、蒸发） （3）高度纯化 ：去除与产物的物理化学性质比较接近的杂质（层析、膜分离、离子交换、沉淀、电泳）。 （4）产品的最后加工：成品形式由产品的最终用途决定（结晶、干燥、蒸馏）。 下游加工一般工艺流程 下游工艺过程决定于产品的性质和要求达到的纯度 如产品为菌体本身，则工艺比较简单，只需经过滤、得到菌体，再经干燥就可，如单细胞蛋白的生产。 如可以从发酵液直接提取，则可省去固液分离步骤。 如为胞外产物则可省去细胞破碎步骤。 第二节 发酵液的预处理 一、发酵液的一般特征 1.含水量高，一般可达90％-99% 2.产品浓度低 3.悬浮物颗粒小，密度与液体相差不大 4.固体粒子可压缩性大 5.液体黏度大 6.产物性质不稳定 二、发酵液预处理的目的和要求 1.预处理的目的： （1）改变发酵液的物理性质，促进悬浮液中分离固形物的速度，提高固液分离的效率 （2）尽可能使产物转入便于后处理的某一相中（多数是液体） （3）去除发酵液中部分杂质，以利于后续各步操作。 2.发酵液预处理的要求: （1）菌体的分离 （2）固体悬浮物的去除 （3）蛋白质的去除 （4）重金属离子的去除 （5）色素、热原质、毒性物质等有机杂质的去除 （6）改变发酵液的性质 （7）调节适宜pH值和温度 三、预处理的方法 （一）加热法 （二）调节悬浮液的pH （三）发酵液的凝聚和絮凝 （四）高价无机离子的去除方法 （五）杂蛋白质的去除 （一）加热法： 降低悬浮液的黏度，除去某些杂蛋白，降低悬浮物的最终体积，破坏凝胶状结构、增加滤饼的空隙度。（不适用热敏性的物质） （二）调节悬浮液的pH 通过调节发酵液pH到蛋白质的等电点使蛋白质沉淀，同时络合重金属离子； 常用的酸化剂有草酸、盐酸、硫酸和磷酸 影响絮凝的因素 絮凝剂的添加量 发酵液的pH 絮凝剂的分子量 搅拌转速 搅拌时间 絮凝技术预处理发酵液的优点不仅在于过滤速度的提高，还在于能有效地去除杂蛋白质和固体杂质，如菌体、细胞和细胞碎片等，提高了滤液质量 （四）高价无机离子的去除方法 钙离子，可用草酸。 镁离子，可用三聚磷酸钠它和镁离子形成可溶性络合物，用磷酸盐处理，也能大大降低钙离子和镁离子的浓度。此法可用于环丝氨酸的提取。 铁离子，可加入黄血盐，使形成普鲁士蓝沉淀。 （五）杂蛋白质的去除方法 热变性 沉淀 大幅度改变pH 四、发酵液的过滤 微