碱性磷酸酶分离纯化鉴定.pptVIP

碱性磷酸酶的分离纯化 有机溶剂分步沉淀法 分离纯化的一般程序 选择材料 破碎细胞 提取 分离纯化 分析及鉴定 AKP溶于30%乙醇、33%丙酮（上清中）， AKP不溶于60%乙醇、50%丙酮（沉淀中）， 原理： 操 作 一、取材及匀浆 取兔肝2g，剪碎， 加入6ml 0.01mol/L醋酸镁和醋酸钠混合液，充分匀浆。 记录体积 （取0.1ml至一新EP管留作A液，测定时稀释25倍） 二、提取 加入2ml正丁醇，搅拌2min，室温放置30min。过滤，留上清。计体积。 三、分离纯化 1、50％丙酮沉淀AKP 加入等体积丙酮，3000rpm×5min，留沉淀， 加4ml 0.5mol/L醋酸镁溶解沉淀，记录体积。 （取0.1ml留作B液，稀释10倍） 2、30％乙醇溶解AKP 每ml溶液中加入95％乙醇0.46ml 2000rpm×5min，留上清（记录体积） 3、60％乙醇沉淀AKP 每ml溶液中加入95％乙醇0.86ml 3000rpm×5min，留沉淀， 加3ml 0.5mol/L醋酸镁溶解沉淀，记录体积。 （取0.1ml留作C液，使用时稀释5倍） 4、33％丙酮溶解AKP 每ml溶液中加入0.33