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利用SSR研究不同国家桃育成品种遗传多样性 　　摘　要：利用34对SSR分子标记对来自不同国家的56份桃育成品种进行遗传多样性分析。筛选的13对SSR引物共检测出226个等位基因，其中多态性等位基因为222个。桃群体的平均Nei’s基因多样度为0.224，Shannon遗传多样性表型指数为0.367，说明桃总群体遗传变异较低；基因分化系数为0.081，与AMOVA分析结果8.13％相近，说明2者遗传变异以群体内遗传变异为主；基因流值为5.657，则说明不同国家间桃育成品种交流比较频繁。根据Nei，s基因多样度和Shannon遗传多样性表型指数2指标所得，欧美品种群遗传变异最高，其次为中国，最后为日本。UP―GMA聚类分析结果表明，品种间的遗传距离与系谱关系基本吻合。 　　关键词：桃；简单重复序列(SSR)：遗传多样性 　　中图分类号：$662．1 文献标识码：A 　　文章编号：1009―9980(2007)05―580一05 　　 　　中国作为桃的原产地，具有丰富的品种资源。19世纪中期以来，全世界范围内桃种质交流频繁，美国与日本以中国上海水蜜优异桃种质为基础育成多个品种，同时前者还利用欧洲桃品种群为基础进行育种。近年来我国结合地方优质品种与国外品种也育成了许多品种。如此繁多的品种和复杂的遗传背景，使得桃育成品种遗传多样性研究成为具有非常重要的意义。 　　利用分子标记技术对桃品种进行遗传多样性研究已有许多报道。warhurton等利用RAPD分析了来自美国、中国和印度共136个桃品种的遗传多样性，表明美国桃遗传多样性远低于亚洲，Badenes等对以西班牙桃为主的品种进行研究，认为本国桃品种的遗传多样性低，2人均提出需从亚洲国家引进桃种质的建议。程中平等则从桃类群问的差异进行探讨，结果显示砧木类、红叶类群体遗传多样性最高。 　　SSR(Simple Sequence Repeats)，又称之为微卫星DNA，是指以少数几个核苷酸(多数为2～4个)为单位多次串连重复的DNA序列。该标记具有信息量丰富、结果稳定、共显性等优点，已在苹果、桃、甜樱桃、李等果树上应用。Aranzana等利用SSR标记对212个桃品种进行分析，但品种主要为欧洲桃。我们利用微卫星技术，对来自不同国家的桃育成品种进行研究，更大范围地探讨品种遗传多样性，从分子水平了解不同国家的桃育种水平，为今后有效地利用育成品种提供科学依据。 　　 　　1　材料和方法 　　 　　1．1材料 　　1．1．1桃品种材料来源于中国、日本和美国3个桃品种群共56份材料，全部取自中国农业科学院郑州果树研究所桃国家种质资源圃，所取材料及编号见表1。 　　 　　 　　1．1．2 引物名称及序列 参考已报道文献，根据等位基因数与品种鉴别力进行引物选择。引物由上海生工有限公司合成，引物编号及名称见表2。 　　1．2方法 　　1．2．1 DNA提取及纯化　采用陈大明SDS法提取基因组DNA，稀释至10μg／L，以备后用。 　　1．2．2 PCR反应与电泳检测　PCR反应总体积为10μL，包括10 ng DNA模板、1.5 mmol／L MgCl2、0.15mmoL／L dNTPs、0.55 μmoL／L引物、1.0 U Too DNA聚合酶、1×buffer。以上试剂全部来自TAKARA公司。PCR反应在MJ Research PTC-100 PCR仪上进行。SSR反应程序为：95℃预变性5 rain，94℃1 min、53℃1 min、72℃l min，共35个循环；72℃8 rain。扩增产物用质量分数6％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，采用银染技术检测。 　　 　　1．3数据统计与分析 　　假定胶上相同迁移率的条带均来自同一位点上的同一等位基因。有带记为1，无带记为0。对每个样品的扩增电泳条带进行统计，构成原始数据距阵。 　　1-3．1 利用DFAC软件处理数据 WINAMOVA软件计算群体间遗传变异的贡献率。 　　1-3-2假设等位基因频率符合哈迪一温伯格平衡利用Popgene软件，计算群体Nei’s基因多样度(H)、Shannon信息指数(I)、群体间基因分化系数(Gst)、基因流(Nm)及群体间遗传距离(GD)。 　　1．3．3 数据统计分析 利用NTSYS统计软件计算品种问遗传距离并采用UPGMA方法进行聚类。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2．1 SSR扩增片段的多态性 　　对34对SSR引物进行筛选，从中选出13对扩增条带清晰且多态性丰富的引物对3个桃群体56份材料进行扩增。表3所示，13对引物共扩增出226条DNA片段，其中多态性片段有222条，占总条带数的98.2％，不同引物扩增条带数从4到38条不等，平均每对引物扩增