第六节 酶工程制药part2.pptVIP

一、模拟酶的概念 二、模拟酶的理论基础 二、模拟酶的理论基础 二、模拟酶的理论基础 二、模拟酶的理论基础 根据Kirby分类法 三、模拟酶的分类 按照模拟酶的属性 三、模拟酶的分类 1、选定印迹分子和功能单位，让它们之间发生互补作用，形成印迹分子功能单位复合物。 2、用交联剂在印迹分子功能单位复合物周围发生聚合反应，形成交联的聚合物。 3、从聚合物中除去印迹分子，得到对印迹分子具有选择性的聚合物。 通过分子印迹技术可以产生类似于酶的活性中心的空腔，对底物产生有效的结合作用，并可以在结合部位的空腔内诱导产生催化基团，并与底物定向排列。 性质：遵循米氏方程，催化活力依赖反应速度常数。 天然酶的缺陷 易于变性失活（酸、碱、有机溶剂、热）； 容易受产物和抑制剂的抑制； 工业反应要求的酸度和温度并不总是在酶反应的最适酸度和温度范围内； 底物不溶于水，或酶的米式常数过高； 酶做为药物在体内的半衰期较短等因素限制了酶制剂的应用。 1. 酶的化学修饰 从广义上说，凡涉及共价键或部分共价键的形成或 破坏的转变都可以看做是酶的化学修饰。 从狭义上说，酶的化学修饰则是指在较温和的条件 下，以可控制的方式使一种酶同某些化学试剂其特异反 应，从而引起单个氨基酸残基或其功能基团发生共价的 化学改变。 2. 酶的化学修饰的目的 酶的化学修饰的目的在于：人为地改变天然酶的一 些性质，创造天然酶所不具备的某些优良特性甚至创造 出新的活性，来扩大酶的应用领域，促进生物技术的发 展。① 提高生物活性；② 增强在不良环境中的稳定性 ；③针对异体反应，降低生物识别能力。 3. 酶的化学修饰的种类及应用 酶的表面化学修饰 大分子修饰（大分子结合修饰） 目前应用最广的酶分子修饰方法。水溶性大分子通过共价键与酶分子表面结合，形成覆盖层。 修饰剂：聚乙二醇（PEG）、右旋糖酐（dextran）、肝素（heparin）、蔗糖聚合物（Ficoll）等。 如：PEG－超氧化物歧化酶（SOD）、PEG－溶血类蛋白质（链激酶、尿激酶等）、PEG－天门冬酰胺酶（ASNase） 酶的表面化学修饰 侧链基团：组成蛋白质氨基酸残基上的功能团。包括氨基、羧基、胍基、巯基、酚基、咪唑基。 主要反应：烷基化反应、酰化反应、氧化还原反应、芳香环取代反应 修饰剂：采用的各种小分子化合物，如2，4－二硝基氟苯、碘乙酸；乙酸酐、邻苯二酸酐；H2O2、2－巯基乙醇；四硝基甲烷、卤素。 烷基化反应 酰基化反应 氧化还原反应 芳香环取代反应 碘代： I2＋ ? + HI 硝化： (NO2)4C + ? ? ?+ (NO2)3CH 交联修饰（交联法） 用双功能基团试剂(如戊二醛)，与酶分子内不同肽链部分共价交联，使酶分子空间构象更加稳定。 固定化修饰（共价偶联法） 通过酶表面的酸性或碱性残基，将酶共价连接到惰性载体上，由于酶所处的微环境发生改变，使酶的最适pH、最适温度和稳定性发生改变。 酶分子内部修饰 （一）蛋白主链修饰（肽链有限水解修饰） （二）氨基酸置换修饰（催化和非催化活性 基团的修饰） （三）金属离子置换修饰（辅因子修饰） 修饰酶的特性 热稳定性提高 抗各类失活因子的能力提高：蛋白酶、抑制剂、酸、碱、有机溶剂 抗原性消除：免疫应答 体内半衰期延长：药用疗效 最适pH改变：接近生理环境 酶学性质改变：Vm，Km，底物专一性 对组织分布能力改变：靶器官 第四节 酶的化学修饰 第四节 酶的化学修饰 第四节 酶的化学修饰 第四节 酶的化学修饰 * * 五、固定化方法与载体的选择依据 1、固定化方法的选择 ⑴ 固定化酶应用的安全性：要按照药物和食品领域 的检验标准作必要的检查。所用试剂是否有毒性和 残留。尽可选择无毒性试剂。 ⑵ 固定化酶在操作上中的稳定性：在选择固定化方法 时要求固定化酶在操作过程中十分稳定，能长期反 复使用，在经济上有极强的竞争力。 ⑶ 固定化的成本：包括酶、载体、试剂的费用，也包 括水、电、气、设备和劳务投资等。 五、固定化方法与载体的选择依据 2、载体的选择 为了工业化应用，最好选择工业化生产中已大量应用的廉价材料为载体，如聚乙烯醇、卡拉胶、海藻胶等。离子交换树脂、金属氧化物及不锈钢碎屑等都是有应用前途的载体。此外，载体的选择要考虑底物的性质，如当底物为大分子时，只能用可溶性固定化酶，不能用包埋型