微生物课件-实验-5实验肠道杆菌和厌氧菌等.ppt

实验五肠道杆菌和厌氧菌、真菌 一、肠道杆菌形态、培养特性及生化反应 1. 形态: 大肠杆菌、变形杆菌、痢疾杆菌 2. 培养（中国兰平板） 大肠杆菌、变形杆菌、 伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、痢疾杆菌 3. 生化反应： （示） 双糖铁基培养基 尿素培养基 3. 生化反应： （示） 双糖铁基培养基 尿素培养基 尿素培养基 ★　成份：20%尿素水溶液 　 0.6%酚红溶液 ★　原理：尿素酶分解尿素产氨气 二、肠道杆菌分离鉴定步骤 1.粪便→中国兰平板 兰色、较大、不透明菌落----大肠杆菌 无色、较小，半透明菌落----致 病 菌 2.生化试验： 双糖铁基、尿素、吲哚 3.血清诊断 上次试验结果观察 双糖铁基培养基结果观察 乳糖 H2S 葡萄糖 动力 乙副伤寒杆菌 — + ⊕ + 痢疾杆菌 — — + — 大肠杆菌 + — ⊕ + R质粒接合传递试验 供体菌：福氏痢疾杆菌 耐链霉素、氯霉素、四环素和磺胺药物 受体菌：大肠杆菌 耐利福平 培养基：中国兰平板 100μg/ml利福平；20μg/ml氯霉素 厌氧芽胞梭菌与厌氧培养法 1、形态观察 破伤风梭菌 产气荚膜梭菌 肉毒梭菌 a. 原理：焦性没食子酸在碱性溶液中能迅速吸收氧气，生成深棕色焦性没食子橙，利用此法可除去试管或平皿等容器中的氧气。 （2）疱肉培养基 1、形态: 单细胞—酵母菌 如白假丝酵母菌 新生隐球菌 多细胞—丝状菌 菌落特征: 酵母型菌落 类酵母型菌落 丝状型菌落 药 敏 试 验 目的要求: 1、了解抗生素敏感试验的操作方法 2、初步作为抗生素敏感试验结果的 判断 3、了解常用抗生素的抗菌谱 纸片法 材料： 1、菌种：葡萄球菌、大肠杆菌 2、培养基：普通琼脂平板 3、抗生素滤纸片：每片含药量：青霉 素1单位，其它抗生素为10微克 分枝杆菌与抗酸染色 1、 形态 2、结构特点 3、抗酸染色 抗酸染色 （1）温染：石炭酸复红溶液 5 min （2）脱色：3%盐酸酒精溶液 0.5-1 min （3）复染：碱性美兰 溶液 0.5 min 菌体圆形，外围是厚荚膜 示教，正面看无明显差别 单细胞 多细胞 白假丝酵母菌 新生隐球菌 酵母型菌落 类酵母型菌落 酵母型菌落 类酵母型菌落 狂犬病病毒包涵体（内基小体） 巨细胞病毒包涵体 （抗生素敏感试验） 绿脓杆菌 葡萄球菌 大肠杆菌 抗药 中度敏感 高度敏感 10 10-15 15 其它抗生素 抗药 中度敏感 高度敏感 10 10-20 20 青霉素 敏感情况 抑制菌圈直径（mm） 判断： 结核杆菌（抗酸染色） 结核杆菌（抗酸染色） 变形杆菌 肠道杆菌形态观察，本次予示教 中国兰平板，淡红微带紫，含乳糖；含蔷薇色酸，其可抑制一般的革兰染色阳性细菌的生长，在碱性时显红色，酸性时显黄色；含中国兰，其碱性时显无色，酸性时显蓝色 大肠杆菌，能分解乳糖产酸，故菌落呈蓝色，而有深蓝色的核心；肠道致病菌，如伤寒杆菌、痢疾杆菌等，不分解乳糖，无色，但在中国兰平板淡红的背景色下，则呈现出红色 介绍接种方法：先穿刺接种，后原路退出，再进行斜面划线接种。注意手法要轻，用接种针，注意烧灼、冷却，坐着操作。通常一次取菌，菌量就足够了，实在觉得可能不够，注意一定要取同一菌落的细菌！ 双糖铁基，观察时，1）注意上层颜色的改变，应以上层的上端颜色进行判断，因为上层下端可能会受到下层代谢产物的影响！