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可降解PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓酶活影响 　　摘 要：采用自然土壤法，研究了可生物降解PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓超氧化歧化酶（SOD）和过氧化物酶（POD）两种抗氧化酶活性的影响。结果表明：整个实验过程中，SOD和POD均在一定的时期内受到了刺激作用，但这种刺激都比较小。低分子量共聚物的影响出现较早，高分子量共聚物的对蚯蚓的毒性影响经过一定时间才表现出来，即滞后现象。值得注意的是，实验末期，实验组中蚯蚓酶活的变化与空白组基本处于相同水平。总之，实验过程中蚯蚓未出现明显的死亡现象，该聚合物对蚯蚓是安全的。 　　关键词：聚丁二酸丁二醇酯-聚乳酸；蚯蚓；超氧化歧化酶过氧化物酶；过氧化物酶 　　研究发现由于聚酯中大量酯键的存在，所以很多聚酯能够被微生物识别而发生微生物降解。其中聚丁二酸丁二醇酯（PBS）是一种具有广泛应用前景的可生物降解聚酯。所以研究该聚合物对生态系统的毒性是非常有价值的。 　　研究物质对土壤环境毒性的一种常用的方法是利用蚯蚓进行试验。经过研究学者的努力，通过判断蚯蚓体内酶活的变化来判断环境的污染程度已成为也一种标准。蚯蚓体内的抗氧化物酶包括超氧化物岐化酶（SOD），过氧化氢酶（CAT）和过氧化物酶（POD）。其中SOD的作用是能够将机体内的O2-转变为H2O2，而CAT和POD可以将H2O2分解为氧气和水。 　　关于其它可降解材料对蚯蚓的影响已有研究，然而关于PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓体内抗氧化物酶活的影响还没有报道。因此，文章研究了PBSLA嵌段共聚物对蚯蚓体内两种抗氧化物酶活的影响。 　　1 试验材料与测试方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 试验样品 　　所提供的试验样品为实验室所合成PBSLA嵌段共聚物，分子量分别为5000、20000和30000。 　　1.1.2 试验试剂和测试仪器 　　考马斯亮蓝G-250；牛血清蛋白；DNS；葡萄糖。 　　组织粉碎机；人工培养箱。冷冻离心机。UV-2006A型可见紫外分光光度计。凝胶液相色谱仪。 　　1.1.3 供试蚯蚓和土壤 　　蚯蚓购于天龙蚯蚓养殖公司，实验前预处理：选择大小均匀（0.3-0.5g），生殖环比较明显的健康成蚓。 　　自然突然实验法：取自咸阳郊区表土（0～20cm厚的地表土），烘干，研磨，过筛（10目，2mm），试验土壤为 土，全氮0.92g?kg-1，全磷0.82g?kg-1，土壤有机质10.76g?kg-1（有机碳6.48g?kg-1），速效钾289.0mg?kg-1，pH=8.4，碱解氮58.87mg?kg-1，速效磷14.5mg?kg-1。 　　1.2 试验步骤 　　根据OECD guideline No 207标准方法，进行毒性试验研究。 　　1.2.1 蚯蚓预培养 　　将直径为15cm的三层滤纸铺在1l的烧杯中，滴加5ml去离子水，充分润湿滤纸，并使得滤纸和烧杯底部无空隙存在。将试验所需蚯蚓放在湿润的滤纸上。（注：蚯蚓数量不宜太多，可分?槎喔錾毡?培养。）然后用滤纸将烧杯口封住，并用竹签对滤纸进行扎孔，最后将烧杯放入人工培养箱中，放置一昼夜。培养箱预设条件：20.5℃， 80%～85%的湿度。 　　毒性试验：分别将试验样品（三种分子量的PBSLA共聚物）用粉碎机进行粉碎10分钟，称取定量的粉末样品（0.1%wt，0.5%wt，2.5%wt）与0.3g的试验土壤加到试验容器中进行混合，搅拌均匀后，用喷雾器定量喷洒6ml自来水，控制容器内的湿度在35%左右。取大小均匀的10条蚯蚓于试验容器中进行培养，用定性滤纸封口后，在用竹签进行均匀扎孔。最后试验容器在人工培养箱中进行培养。培养条件：20.5℃，80%～85%的湿度，每隔12个小时进行光照培养。每隔一定时间进行取样，然后进行粉碎，提取，测试蚯蚓体内酶活。试验周期为30天，且每组试验均设置3组平行样进行对照试验。 　　1.2.2 酶的提取 　　酶的提取方法：将取出来的每组蚯蚓用自来水进行冲洗后，用滤纸擦干，放入组织粉碎机中，按照一定比例（1mg/ml）加入Tris-HCl缓冲溶液，对蚯蚓进行粉碎，转速为10000rpm的转速，将得到的匀浆液用冷冻离心机进行分离（冷冻离心条件：4℃，15000rpm，15分钟）。取上清液0.5ml，加入0.05mol/l Tris-HCl缓冲液（pH为7.8）1ml，定容至1.5ml。 　　1.2.3 酶活的测定 　　酶活性测定：SOD活性的测定参考自俊青等（1998）的方法。POD活性的测定参考吕淑霞等（2003）的方法。 　　1.2.4 数据统计 　　利用软件SPSS17.0将所得到的每组蚯蚓酶活数据，进行统计分析。 　　2 结果与讨论 　　2.1 PBSLA对SOD酶活的影响 　　从图1可以看