协助寄主缓解干旱胁迫植物根围细菌分离及活性初探.docVIP

协助寄主缓解干旱胁迫植物根围细菌分离及活性初探 　　摘要：根据菌株离体条件下产酶活性，从分离到的183株植物根围细菌中筛选了5株具有显著IAA（吲哚乙酸）和ACC（1-氨基环丙烷-1-羧酸）脱氨酶活性的菌株进行温室试验，评价其协助寄主植物缓解干旱胁迫压力的能力。其中菌株H4-1L相对于对照组能够显著缓解干旱对于植物的胁迫压力，根长增加25%～31%，鲜重增加27%～44%，叶绿素含量增加21%～83%，根系活力增加50%～56%。通过形态学特征及16S rDNA序列比对，鉴定该菌株为Pseudomonas putida。 　　关键词：植物根围细菌；抗旱；IAA；ACC脱氨酶；恶臭假单胞 　　中图分类号： S423+.4；Q939.9文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）06-0349-03 　　收稿日期：2013-09-06 　　基金项目：江苏省淮安市科技项目（编号：HASZ2012023）。 　　作者简介：杨威（1983―），男，河北承德人，博士，讲师，主要从事植物病害生物防治研究。E-mail：yangw107@126.com。 　　通信作者：罗玉明，教授，主要从事作物高效生产技术研究。E-mail：yumingluo@163.com。当植物蒸腾速率超过水分吸收速率或土壤缺乏植物可利用的水分时，植物发生干旱胁迫。干旱胁迫是田间条件下存在最广泛的一种作物生长逆境。据统计，世界干旱、半干旱地区占地球陆地面积的1/3[1]，我国干旱、半干旱地区约占国土面积的1/2，同时其他半湿润甚至湿润地区也常会有周期性、季节性或临时性的干旱[2]。2011年我国长江中下游五省大旱，据报道约造成农作物受灾面积370.51万hm2，其中绝收面积16.68万hm2，直接经济损失149.4亿元。 　　目前，在干旱条件下，除了力所能及的调度灌溉水以外，人们主要依靠以下几种途径来缓解干旱对农业生产造成的危害：（1）化学调控方法。一些能促进水分调节、渗透调节、气孔调节和光合调节等一系列生理生化机制的化学物质能增强植物的代谢活性，提高其抗旱性[3-4]，但是无论哪一种化学调节剂都存在经济成本问题以及对于环境、土壤的副作用；（2）基因工程。近年来利用基因工程技术改进植物体内干旱应答基因产物水平已成为培育抗逆性新品种的一种手段，至今已有不少植物已成功导入相关抗旱基因且抗旱程度也有所提高，如水稻、烟草、棉花等[5-6]。但是，利用基因工程培育抗旱品种在蔬菜方面的研究较少，另外在长期的进化过程中，植物自身也建立起了在面对干旱胁迫时的应答反应，并且植物自身调节抗旱能力有限，不足以应对持续干旱带来的胁迫压力。 　　自20世纪70年代植物根围促生细菌（plant growth-promoting rhizobacteria，PGPR）这个概念提出以来[7]，已经在不同寄主植物上、不同的生态环境中分离得到多种促生菌。这些微生物在促进植物生长、抑制病害发生、调节根围微生态结构各个方面得到了广泛的应用[8]，也为人类挽回了巨大的经济损失，其中一些品种已经进行商业化生产。近几年，有越来越多的学者开始不只是关注 PGPR 促生抗病方面的能力，而是将注意力转移到这些有益微生物在协助植物抗逆的作用上来，包括耐盐胁迫、耐干旱胁迫等[9]。Glick等报道，具有ACC（1-氨基环丙烷-1羧酸）脱氨酶活性的菌株能够降低植物根部乙烯含量，促进植物根部伸长[10]。Barea等也证明根部接种产IAA（吲哚乙酸）的菌株能够显著增加植物的干重和根长[11]。 　　本研究旨在通过离体条件下产酶活性筛选，选择具有IAA和ACC脱氨酶活性的植物根围细菌，并且在温室条件下评价其协助寄主植物缓解干旱胁迫的能力。 　　1材料与方法 　　1.1土壤采集及菌株分离 　　在江苏省淮安市武墩镇蔬菜大棚采集黄瓜与辣椒根围土壤样品。采集方法如下：每个温室5点取样，每点之间间隔大于10 m，另外取同一温室内非种植土壤1份作为对照。首先用铁锹挖开植物根基部深10 cm的土壤，然后用小刷子收集附着在植物根表层的土壤，收集后装入小号自封袋，标记编号迅速带回实验室进行下一步处理。 　　本研究采用LB和KB 2种培养基利用稀释涂平板法进行菌株的分离：每份土壤样品取1 g分别溶于9 mL无菌水，然后每组稀释到10-3、10-4、10-5。用移液器分别吸取 100 mL 到相应培养基上，涂布，每个梯度3次重复。标记后置于28 ℃温室培养箱培养，待菌落长出后，根据形态特征挑取进行纯化，-70 ℃保存备用。 　　1.2菌株代谢产物活性检测 　　IAA活性检测：将分离纯化后的细菌接种于含有L-色氨酸（100 mg/L）的LB液体培养基中，30 ℃、180 r/min条件下摇床培养1 d。取50