围绝经期综合征肝郁大鼠模型建立及评价.docVIP

围绝经期综合征肝郁大鼠模型建立及评价 　　【摘要】 目的：用去势SD大鼠造围绝经综合征肝郁模型并从其外观特征及行为学水平评价建模的效果。方法：24只雌性SD大鼠被随机等分为假手术组、去势空白组和去势模型组，每组各8只。在去卵巢制备围绝经期综合征模型的基础上，加以21 d慢性束缚应激结合孤养法建立肝郁模型。应激结束后，观察各组大鼠外观特征，检测各组大鼠体质量、1%糖水消耗率及旷场行为的改变。结果：与假手术组比较，大鼠去势后体质量显著增加，差异有统计学意义（P0.05）；应激造模开始后，去势模型组体质量增长缓慢甚至下降，大鼠毛发干枯、活动减少、大便次数增多、便溏；与假手术组相比，去势空白组和去势模型组在旷场实验中的水平得分和垂直得分均明显降低，差异均有统计学意义（P0.01）；去势模型组较假手术组和去势空白组的糖水偏爱率显著下降，差异均有统计学意义（P0.01）。结论：雌性SD大鼠去势后也会产生部分围绝经期肝郁样症状。在慢性束缚应激结合孤养法的作用下，大鼠的体质量、行为活动进一步减少，因此该方法可以有效复制围绝经期综合征肝郁大鼠模型。 　　【关键词】 围绝经期综合征； 肝郁； 去势； 慢性束缚应激； 行为学 　　围绝经期综合征指妇女绝经前后由于性激素波动或减少所致的一系列躯体及精神心理症状，其中雌激素水平下降是引起该病的主要原因[1-2]。随着生活水平提高，工作压力加大，人口老龄化加剧，围绝经期综合征的发病率逐年增高。肝气郁结证是其主要中医证型，中医药治疗已经取得较好的疗效，而且副作用小[3-4]。目前比较认可的围绝经期综合征肝郁模型是运用自然衰老的大鼠进行造模，然而由于其饲养周期长，成本高，来源非常稀少，因此相关的研究报道相对较少，中医药对其作用机制的了解受到很大的局限[5-6]。而去势大鼠也是公认的围绝经期综合征模型，其阴道脱落细胞涂片及血清性激素水平均和围绝经期发生的改变相似[7-8]。因此本研究拟用去势大鼠模型，联合慢性束缚应激与孤养法进行造模，从外观特征及行为学水平来探讨该模型的有效性，为进一步探讨中医药治疗围绝经期综合征肝郁的科学内涵提供基础。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 健康雌性SD大鼠24只，体质量（220±20）g， 　　清洁级，动物许可证号为SCXK （京） 2002-2009，由福建中医药大学实验动物中心提供。光/暗周期为12 h/12 h（光照时间6：00-18：00），室温（22±2）℃，相对湿度保持为30%～40%，喂常规颗粒饲料及饮用水。适应性饲养两周后，利用敞箱实验对每只大鼠进行行为学评分，水平运动和垂直运动总得分低于40分和高于160分的动物予以剔除，选择各项行为学指标得分相近的24只大鼠，按体质量分层采用随机数字表法将大鼠随机分为假手术组、去势空白组、去势模型组，每组各8只，组间体质量及旷场评分比较差异无统计学意义（P0.05）。 　　1.2 模型的建立 （1）去势：动物分组后行去卵巢手术。手术前，两组大鼠均禁食12 h，按体质量腹腔注射2%戊巴比妥钠（40 mg/kg）麻醉，模型组从腹部正中线切口，切除双侧卵巢，假手术组不切除卵巢，只将卵巢旁与卵巢等大的一块脂肪组织切除。动物手术后自然修复两周，在慢性束缚应激前进行连续5 d阴道涂片检测，观察无成熟脱落细胞，证明卵巢切除完整，造模成功。假手术组动物的阴道脱落细胞依然呈典型的周期性变化。（2）慢性束缚：用慢性束缚应激结合孤养法建立肝郁证大鼠模型，将去势模型组大鼠置于束缚筒内，管壁有若干通风口，通风良好，大鼠能够自由呼吸，束缚应激时间为6 h（9：00-15：00），连续束缚21 d，束缚应激期间禁食禁水。假手术组和去势空白组在同一时段内也是禁食禁水。（3）孤养：去势模型组单笼饲养，假手术组和去势空白组群养，4只/笼。 　　1.3 体质量与行为学检测 　　1.3.1 外部特征及体质量 每天造模前观察并记录各组大鼠的饮食、二便、毛发色泽、情绪行为等外观方面的变化。分别于手术前1天，应激前1天，应激第7、14、21天上午8：00-9：00记录各组大鼠体质量。 　　1.3.2 旷场实验 于动物分组前、应激前1天和应激第21天8：00-12：00进行测试。采用自制长×宽×高 　　=75 cm×75 cm×40 cm的敞箱，底面划分成25个面积相等的方格。旷场的中央放一彩色瓶子激发大鼠的好奇心。拍摄并记录5 min内大鼠的水平运动格数（四爪皆进入记为1分）和垂直竖立次数（两前爪腾空或攀附箱壁记为1分）。每只大鼠均从同一角落放入，测评结束后，及时记录粪便颗粒数，并用75%酒精擦拭以消除气味的影响，待酒精晾干后再进行下一次实验。 　　1.3.3 糖水偏好实验 分别在分组前、造模前和造模结束后检测各组大鼠的糖水消耗率。按照文