哈尼族验方莫那奇对脑出血模型大鼠神经缺损体征及脑组织BDNF阳性细胞数影响.docVIP

哈尼族验方莫那奇对脑出血模型大鼠神经缺损体征及脑组织BDNF阳性细胞数影响 　　【摘要】目的：探讨哈尼族验方“莫那奇”对大鼠脑出血（ICH）后神经缺损体征及脑组织中脑源性神经营养因子（BDNF）阳性细胞数的干预作用。方法：40只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和莫那奇组各10只，以自体血注入法建立大鼠ICH模型，以Berderson评分法对其神经缺损体征进行评分，应用原位杂交方法检测干预后BDNF阳性细胞数的变化。结果：与模型组比较，莫那奇组大鼠神经缺损体征有一定程度恢复，脑组织BDNF阳性细胞数显著增加，具有统计学意义（P0.01）。空白组和假手术组基本无阳性表达细胞。结论：哈尼族验方“莫那奇”促进神经缺损体征恢复和脑组织中BDNF阳性细胞数的增加可能是其治疗脑出血后神经损伤的重要机制之一。 　　【关键词】哈尼族；BDNF；脑出血；脑组织修复 　　【中图分类号】R29 【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517（2015）23-0003-02 　　脑出血（intra cerebral hemorrhage，ICH）是指原发性脑实质的非创伤性出血，是临床常见的脑血管疾病。ICH后脑损伤的缓解和治疗是临床实践中重要的环节[1]，在降低患者致残率和死亡率、改善患者生活质量方面起重要作用。哈尼族验方“莫那奇”在长期临床治疗ICH中效果显著，本实验以ICH大鼠模型作为治疗对象，探讨“莫那奇”对大鼠脑出血（ICH）后神经缺损体征及脑组织中脑源性神经营养因子（BDNF）阳性细胞数的干预作用，以揭示其治疗ICH的作用机理。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物与分组 健康成年昆明种SD大鼠40只，雌雄各20只，体重在220～240g，由昆明医科大学动物实验中心提供，动物质量合格证书号：SCXK（滇）2011-0004。随机分为四组：正常组、假手术、模型组、莫那奇组各10只。实验前动物先在实验室适应环境2周，常规饲养，体重达到250～280g时开始造模；造模前禁食12h，禁水6h；实验中，剔除死亡和不合格者，及时追加动物以补充模型。 　　1.2 仪器设备与试剂 脑立体定位仪（深圳瑞沃德生命科技有限公司）；石蜡切片机（LEICA，德国）；光学显微镜（LEICA，德国）；手术器械（上海医疗器械集团有限公司）；乙醇（成都化学试剂厂，分析纯AR）；水合氯醛（上海试剂公司，分析纯AR），0.1 M PBS（NaCl 9g+NaH2PO4?2H2O 2.964g+Na2HPO4?12H2O 29.01g+蒸馏水至1000ml）；0.1%DEPC溶液（lmlDEPC+999mlPBS）；4%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2～7.6）（多聚甲醛40g+0.1%DEPC溶液至1000ml）；BDNF原位杂交试剂盒（武汉博士德公司）；莫那奇汤（老虎刺皮、黑皮跌打、山皮条、满山香、藤蕉、大荃麻、松节、杨梅皮、天红地绿等各9g，浓度为1200g生药/L）。 　　1.3 ICH模型的制备和筛选 手术器械消毒备用，参照并改进Rosenberg等[2]报道的方法制作ICH大鼠模型。大鼠造模完成待大鼠清醒后，采用Berderson[3]评分法，筛选成功模型动物。根据Berderson神经体征评分法：轻抓尾巴，提起高于桌面10cm，正常大鼠前爪伸直。0分：无神经功能缺损；1分：脑部病变对侧腕关节、肘关节屈曲，肩内收屈曲；2分：上述体征阳性，向麻痹侧推阻力下降；3分：活动时向麻痹侧打圈（呈追尾状）。分数在1分以上（包括1分）即为造模成功。 　　1.4 各组实验动物干预方法 空白组：10只大鼠，不做任何手术处理，常规饲养，每日灌胃生理盐水1ml，每日1次，连续3d。假手术组：10只大鼠，分别用10%水合氯醛（0.4ml/100g）腹腔注射麻醉，俯卧位固定于立体定位仪上，术中微量注射器沿钻孔进针约6mm，留针约7min，缓慢出针，处理创面，清醒后常规饲养，每日灌胃生理盐水1ml，每日1次，连续3d。模型组：10只，造模后不治疗，常规饲养，每日灌胃生理盐水1ml，每日1次，连续3d。莫那奇组：每日按生药4.5g/kg体重/d给予莫那奇汤灌胃，每日1次，连续3d。各组大鼠在造模3d后重新进行Berderson神经体征评分。 　　1.5 标本采集 大鼠腹腔注射10%水合氯醛0.4ml/100g深麻醉，顺序灌注生理盐水和4%多聚甲醛/0.1M PBS（PH7.2～7.4）各约200ml，灌注完毕后在冰浴中快速开颅并取出完整脑，距注射针孔前后各约2mm冠状切开，将标本放入4%多聚甲醛溶液中固定。 　　1.6 制作石蜡切片 固定脑组织30～40min后冲水2～3h，脱水透明（将脑组织依次浸入70%乙醇3h、80%乙醇2h、90%乙醇过夜、95%