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土茯苓中白藜芦醇提取工艺研究 　　摘要 对土茯苓中白藜芦醇的提取进行了研究。通过单因素和正交试验，以白藜芦醇的提取量为指标，高效液相法测含量，优选提取工艺。结果表明：在70℃下，用12倍量95％乙醇回流提取2h效果最佳，其中提取温度和乙醇浓度为主要影响因素。 　　关键词 土茯苓；白藜芦醇；提取；高效液相法 　　中图分类号 O658 文献标识码A文章编号1007-5739（2008）19-0013-02 　　 　　白藜芦醇（resveratrol，简称Res），又名芪三酚，是植物体中产生的一种次生代谢产物二苯乙烯类多酚物质。近年研究发现，白藜芦醇具有诱导肿瘤细胞凋亡、抗菌、抗心肌炎以及免疫调节等多种生物学活性和药理作用[1]。目前已至少在12科31属的72种植物中发现白藜芦醇，其中研究较多的是葡萄和虎杖等[2，3]。也有一些关于百合科植物菝葜中白藜芦醇存在的研究报道[4]，但对其中白藜芦醇具体提取方法研究的报道很少。本试验旨在开发利用百合科植物光叶菝葜的干燥根茎，即土茯苓，对土茯苓中白藜芦醇的提取条件及含量测定进行初步研究。 　　 　　1材料与方法 　　 　　1.1试验材料 　　药品与试剂：土茯苓粗粉（60目筛）、白藜芦醇标准品（辽宁省药品检验所）。仪器与设备：高效液相色谱仪、旋转蒸发仪、紫外分析仪、数显恒温水浴锅。 　　1.2白藜芦醇含量的测定 　　1.2.1色谱条件。色谱柱：Diamonsil C18（250.0mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇∶水（37∶63）；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长306nm；进样量：20μL[5]。 　　1.2.2对照样品溶液的制备。精确称取白藜芦醇10.0mg置50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度、摇匀，即得白藜芦醇的对照样品储备液。 　　1.2.3标准曲线的制备。精密吸取白藜芦醇对照样品储备液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于10mL容量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，备用。分别吸取上述系列溶液各20μL，按上述色谱条件测得峰面积进行分析。结果表明：白藜芦醇浓度（X）在0.02～0.10mg/mL范围内，与峰面积（Y）呈良好线性关系，回归方程为：Y=5.384 7×104X-71.08，R2=0.999 6。 　　1.2.4供试样品溶液的制备及测定[6-8]。土茯苓预先干燥粉碎过60目筛，称取1g，按试验安排提取，提取液经减压浓缩后，用甲醇定容至10mL，用0.45μm微孔滤膜过滤后即为供试样品溶液。吸取供试样品溶液20μL，按上述色谱条件测峰面积。 　　1.3白藜芦醇提取条件优化 　　1.3.1单因素试验。根据白藜芦醇的性质与预试验结果，选择提取温度（A）、乙醇浓度（B）、提取时间（C）、料液比（D）为参考因素，每个因素各取3水平，以白藜芦醇的含量为评价指标研究各因素对提取的影响。 　　1.3.2正交试验工艺优选。根据单因素试验的结论，按表1设计因素水平，选用L9（34）正交设计表安排正交试验。 　　 　　2结果与分析 　　 　　2.1检测结果 　　标准样品用分光光度计在199～600nm波长下扫描，得到白藜芦醇在波长306nm处有最大吸收峰。 　　以306nm为吸收波长，标准样品经过高效液相色谱检测，在检出时间为17.69min时有吸收峰出现，以此为参照测定单因素试验和正交试验中白藜芦醇的含量大小。 　　2.2单因素试验 　　2.2.1提取温度对提取的影响。由图1可以看出，温度升高可提高白藜芦醇的提取率，但由于白藜芦醇有热敏性，当温度达到90℃时，提取率下降。综合考虑，70℃为白藜芦醇提取的适宜温度。 　　2.2.2乙醇浓度对提取的影响。由图2可以看出，乙醇浓度对白藜芦醇的提取有一定影响，这是由于白藜芦醇易溶于乙醇不易溶于水，所以提取率会随乙醇浓度增大而提高，但在乙醇浓度达80%后，提取率没有增长趋势，故80％为乙醇的有效提取浓度。 　　2.2.3提取时间对提取的影响。由图3可以看出，提取时间为1h时白藜芦醇提取率很低，提取时间在1～3h提取率增长明显。在提取时间大于3h后，提取液中白藜芦醇的含量变化甚微，故3h为最佳提取时间。 　　2.2.4料液比对提取的影响。由图4可以看出，在料液比为1∶12之后，提取量变化较小且有下降趋势，故料液比控制在1∶12为宜。 　　2.3正交试验 　　以白藜芦醇提取量为考察指标，正交试验数据见表2和表3。 　　根据极差R的大小，可判断出影响白藜芦醇提取率的因素顺序为A＞B＞C=D，即提取温度＞乙醇浓度＞提取时间=料液比。直观分析可知，最佳提取工艺为A2B3C1D2，即温度70℃，95％的乙醇为提取溶剂，提取时间为2h，料液比为1∶12。由方差分析也可知