其它化学键合相色谱.ppt

校正因子法 被测组分 mi = fi ’Ai 内标 ms = fs’As fi = As mi / Ai ms 先用已知含量的标准溶液与内标测定fi mi = fi Ai ms / As 内加法 在待测样品中加入待测组分i 的对照品，测定加入对照品前后的组分i 的峰面积，按公式计算组分i 的含量 。 一点对照法＋内标法 Ai / Ar mi = Ai Δmi / Δ Ai mi = Δ mi Ai’ / Ar’－ Ai / Ar 流程及主要部件 process and main assembly of HPLC 一．输液系统: 高压泵、单向阀 （一）高压泵 高压泵的任务是完成流动相的输 送。 高压泵应满足如下要求： 流量恒定，无脉动，并有较大的 调节范围。 能抗溶剂的腐蚀。 有较高的输送压力，20～50MPa 的压力。 液缸，便于迅速更换溶剂和进行梯度淋洗。 图18-2 利用步进电动机经齿轮螺杆传动、带动活塞以缓慢恒定的速度移动，使载液在高压下以恒定流量输出。当活塞达到每个输出冲程末端时、暂时停止输出流动相，然后以极快速度进入吸入冲程，再次将流动相由单向阀封闭的载液入口吸入泵中，再重新进入输出冲程的运行。如此往复交替进行。 双柱塞往复式并联泵，由电动机带动凸轮或偏心轮转动，再用凸轮驱动一活塞杆作往复运动，通过单向阀的开启和关闭，定期将储存砸液缸里的液体以高压连续输出。 2. 往复式双柱塞型泵 （二）梯度淋洗装置 HPLC洗脱 等度洗脱：同一分析周期内，流动相组成保持不变。 适用：组分少，性质相近的样品分析。 梯度洗脱：同一分析周期内，程序控制改变流动相组成，即改变溶剂的极性、离子强度或pH值等。 适用：多组分、性质相差大、复杂样品。 优点：缩短时间、提高分离度和灵敏度、改善峰形。 缺点：基线漂移、重现性降低。 高压梯度 利用两台高压输液泵，将两种溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。 低压梯度 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种 溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。 二、 进样和分离系统 1 进样器 六通阀 停流进样 自动进样 装入样品 出口 进样 采样环 泵入溶剂 进色谱柱 2 色谱柱 六通阀工作原理 b. 停流进样装置 c. 2 色谱柱 分析型：100－300mm×2－5mm 制备型：100－300mm×20-40mm 半制备：100－300mm×10mm 三、 检测系统 紫外： 吸光度值A A=εLC 荧光： 荧光强度F F∝C 示差折光：折射率r r∝C 蒸发光： 散色光强I I∝m 安培： 电流I I=nFdN/dt 质谱： 离子流 可变波长检测器 作用原理:基于待测试样对特定波长的紫外光有选择性的吸收，试样浓度与吸光度的关系服从比尔定律。 优点：灵敏度高（最小检测度10–9 g /ml），对温度和流速不敏感，可用于 梯度洗提法中； 缺点：只能用于对紫外光有吸收组分的测定，溶剂的选择受限制。 1. 紫外检测器 (ultraviolet detector) 光电二极管阵列检测器(photodiode array detector) 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。 2. 差示折光检测器 差示折光检测器是一种中等灵敏度（约10–6 g /ml）的通用型检测器，是利用纯流动相和含有待测组分的流动相之间折射率的差别进行检测的。 优点：灵敏度适宜，是一种通用型的检测器； 缺点：对温度变化敏感，不能用于梯度洗提法中。 差示折光检测器光路图 1.钨灯光源 2.透镜 3.滤光片 4.滤光板 5.反射镜 6.透镜 7.工作池 8.参比池 9.平面反射镜 10.平面细调透镜